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番茄叶霉病(Fulvia fulva Cooke)是番茄生产上一种重要病害,目前生产上,化学防治对其有一定预防和防治作用,但随之带来了严重的环境污染等问题。作者对从辽宁、山西、黑龙江、吉林、内蒙古等省及自治区不同的番茄栽培地区采集健康成熟的番茄叶片上,经分离纯化,筛选出56株对番茄叶霉病菌有不同程度抑制作用生防菌株,其中拮抗细菌H402对番茄叶霉病菌具有强烈抑制作用。
经培养形状、菌体形念观察和生理生化测定,鉴定菌株H402为芽孢杆菌。研究表明:H402菌株的菌体为杆状,具圆端,革兰氏染色阳性,常以成对或不同程度的链状排列。细胞大小为0.51-1.25μm×1.30-2.52μm,以周生鞭毛运动。大部分细胞都产生芽孢,芽孢多数中生,呈椭圆形,孢囊不膨大。在NA平板上,菌落圆形,乳白色,有皱折,膜质,不透明。对葡萄糖产酸不产气,接触酶试验、淀粉水解试验、V-P试验、明胶水解试验均呈阳性。
发酵条件研究表明,培养基种类、pH、培养温度、培养时间对该菌株产生拮抗物质有不同程度影响。在1000mL液体培养基中含淀粉20g,蛋白胨20g,NaCL5.0g,pH为7.0,抑菌活性最强,最有利于抗菌物质的产生;当温度为28℃,pH为7,在250mL三角瓶中装160mL液体培养基,接种量为10%(v/v)时,H402菌株产生的抗菌物质抑菌活性最高。培养液中抗菌物质活性随着培养初期时间的延长而增加,培养24h时菌体增长量最大,而后生长缓慢,在培养72h后,菌体产生达到最大值,而后随着培养时间的延长,菌体产生量逐渐减少,抑菌液活性也开始逐渐的减小。
本文初步研究了H402菌株发酵产生的次生代谢产物的理化性质。菌株H402经过连续多次继代培养后,其抑菌作用仍较稳定;高温处理后仍具有菌活性,但活性有所减弱,表明这些物质中部分物质具有耐高温的特性,是几种活性物的混合物。通过生长速率法测定证明,H402菌株发酵液滤液为原药加工的可湿性粉剂对番茄叶霉病菌有较好的效果(EC<,50>为4.39mg/mL)。