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背景与目的:肺癌已成为全球范围内发病率与病死率均居首位的恶性肿瘤。化疗是进展期非小细胞肺癌重要的治疗手段,但是临床上常常由于癌细胞对药物耐药导致化疗失败。近来研究表明非蛋白编码小分子RNA(miRNA)能通过基因突变、调节肿瘤相关靶基因及增殖凋亡相关基因影响肺癌的发生发展及药物的敏感性。miR-155作为miRNA家族中的一种,大量研究也证实其参与了多种恶性肿瘤的发生发展与耐药,但miR-155在肺癌中所担当的角色及影响肺癌的相关机制仍存在争议。本研究通过观察miR-155在A549及其耐药细胞株A549/DDP中的表达差异,探究其对肺癌细胞及顺铂敏感性的影响及机制,为耐药型肺腺癌的个体化治疗提供新的思路。方法:1.细胞培养:人肺腺癌A549、A549/DDP细胞株在RPMI-1640完全培养基(含10%胎牛血清及1%青链霉素混合液)中生长,并放于具有适宜条件的细胞培养箱中(37℃,5%CO2,饱和湿度)。(A549/DDP细胞培养基中加入终浓度为1μg/ml的顺铂以维持其耐药性。)2.耐药株的鉴定及miR-155及TP53INP1m RNA表达差异的检测:MTT法检测A549/DDP及A549两个细胞株对顺铂的IC50,计算耐药倍数;分别提取两种细胞的总RNA,并进行质检,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测A549/DDP细胞株及A549细胞株中miR-155及TP53INP1m RNA的表达差异,实验数据采用2-△△Ct进行分析。3.A549/DDP细胞转染:将实验分为抑制剂组(miR155-inhibitor转染组),空转染组(NC-inhibitor转染组)和未转染组。将FAM标记的miR155抑制物(FAM-miR155-inhibitor)或FAM标记的阴性对照链(FAM-NC-inhibitor)和Lipofectamine?2000混合后转染A549/DDP细胞株。4.指标检测:qRT-PCR检测A549/DDP细胞转染抑制剂前后的miR-155表达情况;qRT-PCR和Western-blot技术检测A549/DDP细胞转染前后预测靶基因TP53INP1及其蛋白的表达情况;Western-blot技术检测A549/DDP细胞转染前后Bax和Bcl-2蛋白的表达变化;MTT实验及流式细胞术检测miR155-inhibitor转染后A549/DDP对顺铂敏感性、增殖能力及凋亡的变化。5.统计学分析:采用SPSS 19.0统计软件分析。定量资料用均数±标准差(x±S)表示,多组间比较用单因素方差分析,应用logistic回归模型计算半数抑制浓度(50%Inhibitory Concentration,IC50)值,以α=0.05作为检验水准。结果:1.顺铂对A549和A549/DDP细胞的IC50分别为16.20±2.27μmol/L、69.72±4.83μmol/L,A549/DDP的IC50值是A549的4.3倍,差异具有统计学意义(t=17.36,P=0.001)。2.qRT-PCR结果结果显示miR155在A549/DDP细胞中高表达,约是A549细胞的8.93倍,TP53INP1 m RNA则在其中低表达,差异均具有统计学意义(分别为t=37.30,P=0.001;t=5.418,P=0.006)。3.miR-155抑制剂转染A549/DDP细胞后,qRT-PCR结果显示A549/DDP细胞株中miR-155的表达量较空载体转染组下调了57.37%。4.qRT-PCR和Western-blot结果显示,miR-155抑制剂转染A549/DDP细胞使miR155表达下调后,其TP53INP1 m RNA及其蛋白表达水平较空载体转染组显著上调,差异均具有统计学意义(P=0.007和P=0.001)。miR155和TP53INP1在肺腺癌细胞中的表达呈负相关。5.MTT检测结果表明,miR-155抑制剂转染A549/DDP细胞后,顺铂对其的IC50值(29.35±3.69μmol/L)明显高于未转染组(70.59±3.47μmol/L)和空转染组(74.18±6.56μmol/L),差异具有统计学意义(P=0.001和P=0.001)。6.miR-155抑制剂转染A549/DDP细胞后,相对于未转染组和空转染组,凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调,Bax蛋白表达上调,差异均具有统计学意义(所有P=0.001)。7.流式细胞术检测结果表明,miR-155抑制剂转染A549/DDP细胞后,未转染组、空转染组和抑制剂组的早期凋亡率分别为(15.77±2.89)%、(15.58±3.19)%、(32.16±3.59)%;晚期凋亡率分别为(17.33±2.12)%、(18.37±1.73)%、(29.24±2.28)%;总凋亡率分别为(33.1±2.38)%、(33.95±2.31)%、(61.4±2.65)%。抑制剂组的早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率与未转染组和空转染组相比均明显升高,差异具有统计学意义(所有P=0.001)。结论:miR-155高表达于肺腺癌耐顺铂A549/DDP细胞株,参与肺癌顺铂耐药的产生。下调A549/DDP细胞株中miR-155的表达能逆转其对顺铂的耐药性、促进凋亡,其机制可能是通过靶向负调控TP53INP1基因和/或通过其他途径下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白实现的。因此,联用miR-155抑制剂和顺铂可能是肺腺癌耐顺铂细胞株潜在的治疗方案。