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背景与目的肺癌是我国乃至全球病死率最高的肿瘤,其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)占80%以上,由于缺乏典型的早期症状,大部分患者在确诊时已经处于疾病的中晚期,因而失去手术机会,因此药物治疗成为肺癌的主要治疗手段。化疗是治疗肺癌的最常见治疗,尽管近来新的化疗药物和各种联合方案的不断推出,然而许多肿瘤对化疗药物的不敏感,或者在化疗过程中逐渐对药物产生耐受性,是导致患者治疗失败和死亡的主要原因,寻找并干预能够影响肿瘤耐药的因素是肿瘤靶向治疗领域当前的研究热点。MTDH是新发现的一个癌基因,在多种肿瘤中呈过表达,其表达异常增高能够激活多种信号途径,增强肿瘤细胞增殖及抗凋亡能力,并且能加速肿瘤新生血管的生成,增强肿瘤细胞侵袭性、转移性。本研究将通过体外细胞实验明确MTDH与NSCLC对化疗耐药之间的相关性,观察MTDH表达水平对NSCLC细胞对化疗药物多西他赛敏感性的关系,并探索其中可能机制,为逆转肿瘤化疗耐药提供理论基础和分子靶点。材料与方法1.体外构建特异性靶向MTDH的siRNA。qRTPCR方法检测HBE细胞,SPCA1. A549、H1299、H1703、H1650及PC9六株NSCLC细胞系的MTDH基础表达水平。选择MTDH基础水平较高的NSCLC细胞转染siRNA,qRT-PCR、Western-blot方法检测转染细胞中MTDH表达水平,验证增高及抑制效率。2.外源性下调MTDH的A549细胞利用MTT方法检测其对多西他赛的IC50；平板克隆试验观察外源性下调MTDH的A549细胞增殖能力的改变及其对多西他赛敏感性的变化；流式细胞检测外源性下调MTDH的A549细胞及对照组细胞在多西他赛处理后细胞凋亡状态的改变；流式细胞检测外源性下调MTDH的A549细胞及对照组细胞在多西他赛处理后细胞增殖周期的改变。3. Western blot检测MTDH表达下调及增高后bcl-2、bax等凋亡相关蛋白表达变化、自噬相关蛋白LC-3表达水平及p-AKT蛋白表达水平。4.利用LY294002阻断PI3K/AKT通路,Western blot检测p-AKT阻断效率,MTT方法检测PI3K/AKT通路阻断前后MTDH外源性下调的H1299细胞及对照组细胞对多西他赛敏感性变化。结果1.设计特异性靶向MTDH基因的siRNA,并转染成功构建MTDH下调的A549细胞。2. MTDH表达可以调节NSCLC细胞对多西他赛敏感性,下调MTDH使得NSCLC细胞对多西他赛诱导的细胞凋亡增加,但对细胞周期无明显影响。3.通过体外实验发现MTDH通过PI3K/ATK/mTOR通路调节NSCLC细胞对多西他赛敏感性。结论与意义通过本研究一系列的实验,我们发现MTDH过表达使得NSCLC细胞对多西他赛耐药性增高,这种作用是通过PI3K/AKT/mTOR信号通路发生的。降低MTDH表达后,可以使得NSCLC对多西他赛的敏感性增高。MTDH抑制剂可能成为NSCLC化疗的增敏剂,为NSCLC化疗提供新的思路。