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背景:脑卒中是一类具有极高致残率和致死率的脑血管疾病。缺血性脑卒中约占脑卒中的87%,目前尚无特效治疗药物。长链非编码RNA(lncRNA)具有广泛的生物学功能,可调控多种疾病的病理过程。但1ncRNA与缺血性脑卒中的关系,目前鲜有报道。本课题组前期使用芯片技术,得到脑缺血损伤大鼠缺血半影区表达异常的1ncRNA谱。本课题利用生物信息学技术,在该1ncRNA谱中筛选到潜在的功能1ncRNA N1LR,并在小鼠脑缺血损伤体内外模型中对其进行功能研究。本课题丰富了 1ncRNA生物学功能,在1ncRNA水平为缺血性脑卒中提供潜在的诊治靶点。方法:制备C57小鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,构建N2a细胞氧糖剥离再灌注(OGD/R)模型,RT-qPCR法检测N1LR在体内外缺血再灌注损伤模型中的表达。构建N1LR与mRNA的共表达网络图谱,预测N1LR的生物学功能。RACE法获取N1LR全长,并用Northern blot验证其全长大小。通过RNAi技术和过表达腺病毒构建体内外N1LR干扰和过表达模型,并进行体内外功能研究:CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期;RNA-FISH法对N1LR进行神经元亚细胞定位,神经功能缺损评分评估神经元损伤程度,TTC染色计算脑梗死体积,Tunel法检测缺血半影区神经元凋亡,尼氏染色检测神经元丢失。机制上,RT-qPCR检测Nck1 mRNA水平;western blot检测p53蛋白水平;流式细胞术检测p53蛋白磷酸化水平。结果:在缺血半影区,N1LR的表达水平在缺血0.5 h最大,上调2.06倍,并随缺血时间继续延长而下调,缺血2h下调0.18倍;在N2a细胞OGD/R模型,N1LR的表达模式与体内相似,N1LR的表达在复氧复糖4 h后达高峰,上调3.27倍,并随复氧复糖时间继续延长而下调,复氧复糖16 h后下调至0.28倍。沉默或过表达N1LR不影响正常N2a细胞的周期分布;N1LR过表达可致OGD/R损伤的N2a细胞Go/G1期百分比下降,S期百分比升高;沉默N1LR的表达对OGD/R损伤的N2a细胞不产生明显影响。N1LR过表达可显著提高OGD/R损伤的N2a细胞的活力,抑制细胞凋亡;沉默N1LR则降低了 OGD/R损伤的N2a细胞的活力,促进细胞凋亡。N1LR过表达降低MCAO小鼠神经功能缺损得分,脑梗死体积缩小,并降低缺血半影区神经元凋亡率,神经元丢失减少;沉默N1LR则提高了 MCAO小鼠神经功能缺损得分,脑梗死体积扩大,同时使缺血半影区神经元凋亡率提高,神经元丢失增多。机制上,沉默N1LR导致NcklmRNA表达上调,但N1LR过表达不影响Nckl mRNA的表达;N1LR不影响N2a细胞p53蛋白的表达,N1LR过表达显著降低p53蛋白Ser15磷酸化水平,而沉默N1LR则提高p53蛋白Ser15磷酸化水平。结论:N1LR可能通过抑制p53蛋白Ser15磷酸化而抑制其活化,对缺血后神经元发挥保护功能。N1LR是治疗缺血性脑卒中的潜在靶点。