东亚飞蝗基因Lm-nxf1的分子克隆和功能研究

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在真核生物细胞中,细胞核和细胞质被细胞核膜所分隔,仅有极性离子,小分子中间代谢产物以及小于40KD的蛋白质等小分子能自由通过细胞核膜。大分子RNA分子不能自由的通过细胞核膜。RNA分子通过细胞核膜需要信号分子介导,在消耗能量的情况下,与可溶的转运受体形成蛋白核酸复合体的情况下通过细胞核膜。不同种类的RNA分子通过细胞核膜的转运受体并不相同,介导的过程也不尽相同。  mRNA分子从细胞核穿过细胞核膜进入到细胞质的过程是由一类在进化上相对保守的蛋白质家族来辅助完成的。在核转运因子家族中通常存在一个由nxf1基因编码的核转运因子承担大部分的mRNA转运功能,对细胞中mRNA的转运起主要作用。在果蝇和线虫对nxf1基因的研究报道中,发现该基因是一个对生命活动必需基因,存在干扰致死现象。东亚飞蝗作为一种重要的农业害虫,寻找适宜的杀虫靶标来达到对东亚飞蝗的防治是十分重要的。nxf1基因可望成为新的靶标位点,但在东亚飞蝗中对该基因的相关研究尚无报道。因此,选择了东亚飞蝗nxf1基因进行功能研究,探究其作为害虫防治靶标位点的可能性。  克隆得到了东亚飞蝗的nxf1基因Lm-nxf1,该基因全长cDNA序列为2394bp,开放阅读框编码642个氨基酸残基。尽管Lm-nxf1基因在东亚飞蝗不同组织中的表达量不同,但在供试组织中都有表达。采用dsRNA可有效干扰Lm-nxf1基因的转录,分析在细胞中mRNA分布情况发现:RNA干扰Lm-nxf1使细胞核内mRNA向细胞质的转运受阻,表明该基因是mRNA转运所必需。生物活性测定发现干扰Lm-nxf1基因是致死的:注射 dsRNA10天后东亚飞蝗累积死亡率超过到90%,而对照处理的蝗虫死亡率不到10%。沉默Lm-nxf1基因后,血淋巴中细胞数量大量减少且血细胞形态发生变化,并且导致东亚飞蝗肠道和肠道菌群发生变化,表明该基因对血细胞、肠道系统和肠道免疫有重要影响,可能是干扰该基因后蝗虫死亡的重要原因。上述研究结果表明,Lm-nxf1基因对维持东亚飞蝗组织和器官的正常功能具有重要作用,是影响其存活的必需基因,可望靶标基因在害虫防治中应用。
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