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目的: 对比经乙肝核心抗原(hepatitis B virus core antigen,HBVc)-黑色素瘤抗原-A3(melanoma antigen gene-A3,MAGE-A3)融合蛋白负载的外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)、树突状细胞(dendritic cell,DC)、CD8-细胞激活的效应细胞对人非小细胞肺癌细胞的特异性体外杀伤作用。 对比分别负载乙肝核心抗原(hepatitis B virus core antigen,HBVc)-黑色素瘤抗原-A3(mehnoma antigen gene-A3,MAGE-A3)融合蛋白、黑色素瘤抗原-A3(mehnoma antigen gene-A3,MAGE-A3)多肽、乙肝核心抗原(hepatitisB virus core antigen,HBVc)的抗原提呈细胞(Antigen presenting cell APC)激活的效应细胞对黑色素瘤抗原-A3(mehnoma antigen gene-A3,MAGE-A3)高表达的人非小细胞肺癌细胞的特异性体外杀伤作用。 方法: 本研究先从健康的人的外周血液中将单个核细胞(peripheral blood monocyte cell,PBMC)分离出,使用粒—巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)和白介素-2(interleukin-2,IL-2)刺激PBMC,从中诱导出树突状细胞(dendritic cell,DC)、CD8-细胞。将外周血单个核细胞(peripheral blood monocyte cell,PBMC)、树突状细胞(dendritic cell,DC)、CD8-细胞分别作为本研究的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),将抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)分为3组,分别负载HBVc-MAGE-A3融合蛋白、MAGE-A3多肽、乙肝核心抗原(hepatitisB virus core antigen,HBVc)中的每种抗原,负载后与单个核细胞(peripheral blood monocyte cell,PBMC)共培养,诱导出特异性细胞毒性单个核细胞(peripheral blood monocyte cell,PBMC),以该单个核细胞(peripheral blood monocyte cell,PBMC)作为效应细胞,以高表达MAGE-A3抗原的人非小细胞肺癌细胞株H358为靶细胞,低表达MAGE-A3抗原的细胞系293T作为对照,进行肿瘤细胞杀伤试验。 结果: 1.负载HBVc-MAGE-A3融合蛋白抗原的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)、树突状细胞(dendritic cell,DC)、CD8-细胞作为抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)能够成功诱导出特异性的效应细胞,并且对非小细胞肺癌细胞有显著的杀伤作用,外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)作为抗原提呈细胞(antigen presenting cell APC)其杀伤率显著性高于树突状细胞(dendritic cell,DC)作为抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)、CD8-细胞作为抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)的对照组(P<0.05)。 2.在负载乙肝核心抗原(hepatitis B virus core antigen,HBVe)-黑色素瘤抗原-A3(melanoma antigen gene-A3,MAGE-A3)融合蛋白、黑色素瘤抗原-A3(melanoma antigen gene-A3,MAGE-A3)多肽、乙肝核心抗原(hepatitis B virus core antigen,HBVc)的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)激活的效应细胞,在效靶细胞比为20∶1时,对黑色素瘤抗原-A3(mehnoma antigen gene-A3,MAGE-A3)高表达的人非小细胞肺癌H358细胞的特异性体外杀伤作用显著优于黑色素瘤抗原-A3(melanoma antigen gene-A3,MAGE-A3)低表达的293T细胞对照组。负载乙肝核心抗原(hepatitisB virus core antigen,HBVc)-黑色素瘤抗原-A3(melanoma antigen gene-A3,MAGE-A3)融合蛋白的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)激活的效应细胞对黑色素瘤抗原-A3(melanoma antigen gene-A3,MAGE-A3)高表达的人非小细胞肺癌H358细胞的特异性体外杀伤作用显著优于黑色素瘤抗原-A3(melanoma antigen gene-A3,MAGE-A3)多肽组及乙肝核心抗原(hepatitis B virus core antigen,HBVc)(P<0.05)。 结论: 1.外周血单个核细胞、树突状细胞、CD8-细胞均能作为抗原提呈细胞,能够成功诱导出特异性的效应细胞,并显著的特异性杀伤非小细胞肺癌细胞。外周血单个核细胞作为抗原提呈细胞比树突状细胞、CD8-细胞更具优势。 2.HBVc-MAGE-A3融合蛋白的结构让它能够更好的暴露出抗原,结合抗原提呈细胞的亲和力更强。比MAGE-A3多肽、乙肝核心抗原作为负载抗原提呈细胞的抗原更有优势。 3、MAGE-A3作为肿瘤特异性抗原,负载到抗原提呈细胞能特异性的杀伤MAGE-A3高表达的非小细胞肺癌细胞。