血小板膜糖蛋白与凋亡相关联的研究

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目的探讨抗血小板膜表面GPIba单克隆抗体,SZ-2、AN51是否能够诱导血小板凋亡。方法取健康志愿者的新鲜静脉血,分离得到富含血小板的血浆(PRP)和洗涤血小板。将洗涤血小板与抗GPIba单克隆抗体SZ-2、AN51(2ug/ml)和阴性对照组IgG、H1P1(2ug/ml)37°孵育不同的时间后,用流式细胞仪检测线粒体跨膜电位(△ψm)的去极化水平;Western blot方法检测促凋亡蛋白bak和bad、抗凋亡蛋白bcl-xl和bcl-2以及caspase-3蛋白的表达量水平。结果①SZ-2、AN51抗体时间依赖性的诱导△Ψm去极化,结果显示将洗涤血小板孵育在不同抗体1-3h阴性组与阳性组△Ψm去极化水平无差别(P>0.05),无统计学意义;自孵育4h开始,阴性组与阳性组△Ψm去极化水平有差别(*P<0.05),有统计学意义。②将洗涤血小板孵育在不同抗体6h后,用WB方法测血小板中促凋亡蛋白与抗凋亡蛋白的表达。结果显示SZ-2、AN51抗体能够引起血小板促凋亡蛋白Bak、Bad表达增多,抗凋亡蛋白Bcl-x1、Bcl-2表达减少;SZ-2抗体能引起Caspase-3蛋白32kd表达减少,但未或得剪切后17kd条带。③SZ-2.AN51抗体仅是一种微弱刺激,不足以引起血小板PS外翻。结论抗血小板膜表面GPIba单克隆抗体,SZ-2、AN51能够通过内源性途径引起血小板凋亡,但凋亡幅度较弱。
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