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单增李斯特菌是一种能引起人畜共患病且具有高致病性的食源性致病菌。广泛存在于自然界中,能耐受较高的渗透压,在土壤、污水、烂菜中均有该菌存在。这一致病菌主要污染动物性食品,能够引起较高的病死率,因此,对这一致病菌的检测具有重要现实意义。本研究利用单增李斯特菌的表面蛋白,建立了特异性的ELISA检测方法。基于实验室前期工作中对单增李斯特菌(ATCC19111)己经鉴定出来的16个具有免疫反应的蛋白点,通过分析筛选出一个特异性较强的表面蛋白点,结合该蛋白的三维结构,确定该蛋白中特异性较强的氨基酸序列,并在E.coliBL21(DE3)中进行重组表达,得到分子量大小为26.3 kDa的融合蛋白。将得到的重组融合蛋白经过纯化作为免疫原分别免疫新西兰白兔和SPF级母鸡制备兔多克隆抗体和鸡多克隆抗体。利用纯化后的兔源多抗(IgG)和鸡源多抗(IgY)建立了单增李斯特菌双抗夹心ELISA检测方法。通过优化,确定检测方法的最佳条件:以兔多克隆抗体作为捕获抗体,鸡多克隆抗体作为检测抗体,包被量为0.5μg/well,封闭液为溶于PBS的0.5%的脱脂乳粉,37℃封闭1 h,检测抗体的稀释倍数为400倍,抗体作用时间为1 h,酶标二抗的稀释倍数为10000倍,抗体作为时间为30min。对建立的双抗夹心ELISA方法进行评价,其检测限为6×106CFU/mL,定量限为1.2×107CFU/mL。用该检测方法对5株单增李斯特菌,5株李斯特菌属内的其它菌种、以及5株非李斯特菌进行特异性检测,检测结果显示该检测方法具有较好的特异性。选取生牛肉和脱脂奶作为实际样品,向其中接种不同量的单增李斯特菌进行增菌培养,采用双抗夹心ELISA检测方法进行检测。结果表明,增菌24h后牛肉的检测灵敏度为101 CFU/mL、脱脂奶的检测灵敏度为102CFU/mL。本论文建立的检测方法特异性好,灵敏度高,在实际样品中能够达到快速有效的检测目的,对单增李斯特菌的预防和控制具有重要的实际意义。