固定化小分子研究生物分子相互作用的新方法

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本论文提出了一种研究蛋白质相互作用的新方法:先利用固定化小分子吸附目标蛋白,以形成小分子-目标蛋白复合物,再考察小分子-目标蛋白复合物与其相关蛋白间的相互作用,并将其应用于多巴胺-单胺氧化酶B复合物与其相关蛋白间相互作用的初步研究以及多巴胺参与下的多巴胺能神经细胞中功能蛋白间相互作用的前期研究。 实验结果表明:(1)串联使用合成的高、低两种密度多巴胺层析材料能有效地分离纯化猪肝单胺氧化酶B。SDS-PAGE凝胶电泳结果显示:分离纯化出的单胺氧化酶B为单一蛋白质带,Bandscan软件分析其纯度约为95﹪,其相对分子量约为60000Da。纯化后的酶比活为8921.4U/mg,纯化倍数为4.9。(2)基于底物与酶的相互作用,利用固定化多巴胺吸附单胺氧化酶B,锁定结合状态,形成多巴胺-单胺氧化酶B复合物,制备成多巴胺-单胺氧化酶B复合物层析材料,在近似胞内液环境下,通过层析操作获得了可能参与调控单胺氧化酶B催化功能的三种调节蛋白,相对分子量分布在50000Da~80000Da。(3)利用多巴胺层析材料有效地吸附了一种多巴胺能神经细胞中与固定化多巴胺有较强相互作用的蛋白,MALDI-TOF-MS质谱结果显示该蛋白的相对分子量为66652,Bandscan软件分析其纯度可达96﹪,可用于进一步研究该蛋白的功能,也可用于研究多巴胺与该蛋白形成的复合物与其相关蛋白间的相互作用。 以上研究结果表明:利用固定化生物小分子吸附目标蛋白,以及利用固定化小分子-目标蛋白复合物研究其相关蛋白的研究方法可行,可作为研究生物分子间相互作用的新方法应用于功能蛋白质组学的研究。
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