果树病毒病的致病特点是扩散性强,持久性和难以防治性,严重威胁着果树的生长发育。本实验第一部分通过对影响RT-PCR扩增因素进行研究,建立了葡萄卷叶病毒(GLRaV-Ⅲ)的RT-PCR检测体系,并且对该体系进行优化设计。在回收纯化GLRaV-Ⅲ扩增的特异DNA片段的基础上,对其进行了克隆测序研究。主要结果如下:1.建立了GLRaV-Ⅲ的RT-PCR检测体系,进一步优化了该检测体系,实现了高效低成本。结果表明,要获得良好的RT-PCR扩增,GLRaV-ⅢPCR体系中dNTPs浓度要为100μmol/L,TaqE的用量为1.0U,引物浓度在0.3～1.5μmol/L之间,MgCL2的浓度为0.9 mmol/L。退火时间是60s,退火温度在52℃～58℃之间,变性温度达到94℃,变性时间是60s,延伸时间2min,循环25次。2.以GLRaV-Ⅲ的病毒RNA为模板,通过RT-PCR技术获得了病毒特异扩增的部分CPgene cDNA片段,克隆到pUCmT载体上,构建了病毒部分CPgene cDNA的重组质粒。序列分析表明,它们的核苷酸序列与国外已发表的序列的碱基数完全相同,进一步佐证了RT-PCR检测结果的可靠性。同源性达到了99.67%。在果树脱病毒的研究中,小茎尖结合热处理法是目前常用的一种较有效的方法,小茎尖培养体系的建立,是病毒脱除的前提,也是脱毒苗快速繁殖的保证。本实验第二部分以樱桃砧木Colt的小茎尖为外殖体进行组织培养体系的建立,对繁殖各个阶段的多种影响因素组合进行了系统研究,初步建立了一套较为完整的樱桃砧木Colt的小茎尖培养体系。在茎尖分化培养中,合适的培养基为1/2MS+ 1.0mg/L BA +0.1mg/L IBA。在增殖培养中,经过筛选得出,最佳培养基为1/2MS+ 1.0mg/L BA +0.2mg/L IBA+0.5 mg/L GA3,增殖倍数高,植株生长势旺,增殖阶段最适的pH值为5.2～6.0。最适的蔗糖浓度是2～3%。生根培养阶段,培养基1/2MS+ 0.5 mg/L IBA上试管苗的生根效果最好,生根率高。