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背景/目的 幽门螺杆菌(Helicbacter pylori,Hp)感染与胃癌和胃粘膜相关性淋巴组织淋巴瘤的发生密切相关。但致病机制不明。Hp不具备基因毒性,不会直接引起细胞DNA的突变和细胞的恶性转化,但Hp的生化特征可能参与胃粘膜上皮细胞的癌变过程;Hp分泌的化学物质可直接或间接促进细胞分裂,增加胃上皮细胞的增生率。此外,Hp感染还通过宿主对感染的免疫应答,提供内源性致突变原,参与并促进肿瘤的发生。最近的研究(1999年)发现:Hp可产生杀菌肽样抗菌肽,这种Hp抗菌肽不仅具有抗微生物特性,抑制胃肠道内快速繁殖的微生物,而且与Hp产生的许多毒力因子一样可影响机体的炎症反应,具有炎症预激活性。作为Hp分泌的化学物质,Hp抗菌肽伴随Hp定居而分泌至胃粘膜表面,其对胃粘膜上皮细胞长期作用所导致的影响不容忽视。而对于Hp抗菌肽的提取、纯化,文献中采用的是层析法,但这种方法流程复杂、费用高、费时长并且提取量少。因此本课题采用人工合成和从幽门螺杆菌中提取纯化二条途径来制备实验所需Hp抗菌肽;通过研究Hp抗菌肽对消化道常见致病菌的杀菌作用,探讨Hp抗菌肽的临床及流行病学意义;通过研究Hp抗菌肽对胃粘膜上皮细胞和胃癌细胞增殖的影响,探讨Hp抗菌肽的产生与胃癌发生的关系;为幽门螺杆菌的致病性和致病机理研究提供新的实验依据。 方法 采用超滤法提取、纯化的天然Hp抗菌肽,试图建立一种新的简便高效的Hp抗菌肽的纯化方法。应用人工合成的Hp抗菌肽Hp(2-20),采用琼脂扩散法检测Hp抗菌肽及天然抗菌肽Cecropin B对抗菌肽活性测定标准菌E.coli K12D31的抗菌活性及致死浓度(LC);检测Hp抗菌肽对消化道常见致病菌的抗菌活性及致死浓度;平板菌落计数法检测Hp(2-20)的抑菌率。MTT法测定Hp(2-20)、Cecropin B对胃粘膜上皮细胞株GES-1、胃癌细胞株SGC-7901的影响及半数抑制浓度。博卜研究生毕业论文结果 采用超滤法未能提取、纯化出天然Hp抗菌肤。合成的Hp抗菌肤Hp(2一20)及天然抗菌肤CeeropinB对大肠杆菌E.coli K12D31的LC分别为65 p mol/L、0.44 p mol/L,Hp(2一20)的抗菌活性较天然抗菌肤CeeropinB低。Hp(2一20)对消化道常见致病菌福氏志贺菌、伤寒、副伤寒沙门菌和致病性大肠杆菌具有杀伤作用,致死浓度为65一197 p mol/L,并可在12min内完全抑制细菌生长。但小肠结肠炎耶氏杆菌及金黄色葡萄球菌对HP(2一20)不敏感,致死浓度>1014 p mol/L。Hp(2一20)的杀菌作用明显低于eecropinB。Hp(2一20)及eeeropinB对胃癌细胞具有浓度依赖性细胞毒作用。Hp(2一20)对胃粘膜上皮细胞株GES一1、胃癌细胞株SGC一7901的半数抑制浓度(Ie50)为531、500.5 p mol/L。eeeropinB对胃粘膜上皮细胞株GES一l、胃癌细胞株SGC一7901的半数扣J制浓度(ICS。)为102、25 p moFL。Hp(2一20)在相对较低浓度时对胃粘膜上皮细胞有促进增殖的作用。结论 幽门螺杆菌抗菌肤可抑制胃肠道内快速繁殖的致病菌的生长,抗菌活性较天然抗菌肤ceeropinB低。感染Hp的宿主可能拥有生存竞争优势。Hp抗菌肤对胃癌细胞具有浓度依赖细胞毒作用,在相对较低浓度对胃粘膜上皮细胞有促进增殖的作用,可能与Hp长期感染时胃癌发生的可能性增加有关。