论文部分内容阅读
人类头颈部鳞癌是全球发病率较高的几种恶性肿瘤之一,它的病情进展较快,经常预后不良,是严重威胁人类健康的疾病之一。这与头颈部鳞癌常常早期发生转移且局部侵袭严重有关。近年来,虽然采用了手术、化疗和放疗等多种方法综合治疗,但是头颈部鳞癌的生存期没有明显改善,晚期患者生存质量很差。因此迫切需要寻求找到更多更确切的治疗靶点,以抑制肿瘤的转移和侵袭,从而提升头颈部鳞癌的治疗效果。目的:MALAT1是一种在哺乳动物进化过程中是高度保守的且具有重要功能的长链非编码RNA,它参与多种肿瘤的发生和发展。本文旨在探究,在头颈部鳞癌中MALAT1的表达水平,高表达的MALAT1是否可以促进肿瘤的局部侵袭和转移,以及MALAT1的调控机制。方法:1.通过TCGA数据库和NIH-GEO数据库分析MALAT1的表达水平。收集天津医科大学肿瘤医院颌面耳鼻喉肿瘤科手术标本,进行FISH染色,比较肿瘤组织和邻近正常组织着色情况。利用TCGA数据库中“Pan Cancer”分析mi R-30a的表达水平。2.购买头颈部鳞癌SCC15和SCC25细胞系进行体外实验。通过转染siRNA抑制MALAT1的表达,利用Transwell实验和划痕实验检测肿瘤细胞的侵袭和转移能力;利用蛋白质印迹实验检测相关蛋白的表达水平;利用q-PCR实验检测相关基因的表达水平;利用免疫荧光实验检测细胞骨架形态的变化;利用荧光素酶报告实验检测基因结合的位置;利用免疫共沉淀实验检测基因结合的方式。3.建立人类头颈部鳞癌裸鼠原位种植模型,活体成像技术观察肿瘤生长的情况。定时称量裸鼠体重,处死裸鼠后测量肿瘤的大小和重量。结果:1.HNSCC标本中有异常的MALAT1过表达,且肿瘤组织MALAT1的表达水平明显高于邻近的正常组织。2.抑制MALAT1的表达后,MMP2和MMP9蛋白水平降低,上皮标志物E钙粘素表达升高,间质标志物N-cadherin、Vimentin和Twist表达降低。在有/无Matrigel胶的Transwell实验中,穿出的细胞均减少。细胞骨架发生明显改变,伪足消失。促进mi R-30a表达后,MMP2和MMP9蛋白水平降低,E-cadherin表达升高,间质标志物N-cadherin、Vimentin和Twist表达降低。Transwell实验穿出的细胞均减少。细胞骨架中典型的伪足结构消失。mi R-30a可以直接与MALAT1结合,而MALAT1可以抑制mi R-30a的表达。STAT3能够直接与MALAT1结合,并且两者的表达存在明显的正相关。TGF-β与STAT3和MALAT1的表达为正相关,与mi R-30a的表达为负相关。3.通过活体成像技术观察肿瘤大小,处死裸鼠后测量肿瘤大小和重量可知,抑制STAT3和MALAT1的表达、促进mi R-30a的表达均可以达到抑制肿瘤生长的作用。结论:1.MALAT1可以促进头颈部鳞癌的侵袭和转移,这与其参与调控EMT进程有关。2.MALAT1/miR-30a的表达受TGF-β和STAT3的调控。3.头颈部鳞癌裸鼠原位种植模型实验结果与体外实验结果一致。