【摘 要】
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目的:由进化保守的基因编码的三基序蛋白(Trim)家族参与了细胞免疫、炎症反应、抗病毒活性和肿瘤进展等多种生物学过程。作为这个蛋白家族的一员,三基序蛋白59(Trim59)已经被
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目的:由进化保守的基因编码的三基序蛋白(Trim)家族参与了细胞免疫、炎症反应、抗病毒活性和肿瘤进展等多种生物学过程。作为这个蛋白家族的一员,三基序蛋白59(Trim59)已经被报道是一种与多种肿瘤的复发与进展相关的新型分子标志物,例如肺癌、胃癌、宫颈癌、骨肉瘤等。然而,Trim59与膀胱癌之间联系还研究的很少。本研究旨在探索Trim59在膀胱癌组织中的表达水平以及进一步研究其对膀胱癌的调控方式和相关机制。材料和方法:本次研究中,我们采用实时定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)验证了 15对膀胱癌组织和对应癌旁正常组织以及3株膀胱癌细胞株中Trim59的表达水平。使用Transwell实验技术检测Trim59对膀胱癌细胞侵袭和迁移能力的调控。细胞克隆形成实验和CCK8细胞增殖实验评估Trim59对膀胱癌细胞增殖活性的影响。运用流式细胞术评估Trim59对膀胱癌细胞凋亡的调控。通过Western Blot 实验检测上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白以及肿瘤转移相关的TGF-β/Smad2/3信号通路的影响。结果:qRT-PCR结果显示,与癌旁组织相比,Trim59在膀胱癌组织中呈高表达(P<0.05);Trim59在膀胱癌细胞系T24、5637、TCCSUP中的表达量高。在膀胱癌细胞中下调Trim59能够使细胞的凋亡率上升(P<0.05),细胞克隆实验和CCK8增殖实验提示下调Trim59能显著抑制膀胱癌细胞的增殖活性(P<0.05)。下调Trim59能通过下调TGF-β蛋白的表达水平从而减弱TGF-β/Smad2/3信号通路的磷酸化水平,继而影响上皮间质转化相关蛋白表达,包括间质表型蛋白N钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达降低(P<0.05),从而抑制了膀胱癌细胞的侵袭(P<0.05)和迁移(P<0.05)的能力。TGF-β补救性实验提示,在膀胱癌细胞中下调Trim59的同时,通过使用重组人细胞因子TGF-β(Rh TGF-β)的刺激,能够使得先前被抑制的肿瘤相关功能出现逆转。结论:下调Trim59在膀胱癌中通过调控TGF-β/Smad2/3信号通路抑制肿瘤的转移。
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