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本研究以实验室前期在多酶组合降解米糠细胞壁组分过程中发现的白色物质为对象,经初步分析确定其植酸含量较高,借鉴前人对米糠中富含植酸的糊粉粒的研究,采用不同方法提取获得该白色物质,分析其常规成分组成,观察其微观形态。并经酸和植酸酶水解、制备液相分离降解组分、质谱和核磁共振波谱分析等手段进一步研究该物质的结构特点。试验共分为以下三个部分:
试验一:白色物质的提取及常规成分测定分别采用多酶组合法和葡聚糖-聚乙二醇双水相法提取脱脂米糠中的白色物质。测定提取物中主要矿物质、氨基酸、单糖和植酸含量。结果表明:以干物质计,多酶组合法和双水相法提取的白色物质中植酸的含量分别为27.26%和22.06%。多酶组合法和双水相法提取的白色物质中均有较高含量的钙、镁、钾、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、亮氨酸、甘氨酸、丙氨酸、葡萄糖、木糖和阿拉伯糖。
试验二:显微结构观察通过扫描电子显微镜观察多酶组合法和双水相法提取的白色物质及米糠的微观结构。结果表明:多酶组合法提取的白色物质是由一系列直径1-4μm,表面透明光滑或白色有裂纹,植酸为主要成分的球形颗粒和细胞碎片组成。提取的白色物质是由一系列直径1-3μm,表面光滑的白色球体颗粒、淀粉和少量细胞碎片组成。米糠中主要存在直径大小不一的两种球形颗粒:较大的颗粒直径约为6.00μm,较小的颗粒直径约为2.06μm。米糠经过膨化处理后,球形颗粒从细胞晶格中脱落。综上,多酶组合法和双水相法提取的白色物质有以下共同特点:植酸含量较高,呈球形。因此将多酶组合法提取的白色物质归类为含植酸颗粒。
试验三:组分结构研究分别采用植酸酶或0.01 M的盐酸对多酶组合法提取的含植酸颗粒进行水解,水解液经Prep-HPLC分离收集。分别测定各分离组分中主要氨基酸和单糖含量,LC-MS确定分离组分的分子质量,31P NMR确定分离组分中磷的位置。结果表明:植酸酶水解含植酸颗粒产生的11种组分中,谷氨酸、甘氨酸、亮氨酸为主要的氨基酸;鼠李糖、阿拉伯糖和葡萄糖为主要的单糖,半乳糖和甘露糖在多数组分中未检出。0.01 M盐酸水解多酶组合法提取的含植酸颗粒,水解液经Prep-HPLC分离得到的10种组分中,天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸和丙氨酸为主要的氨基酸;鼠李糖、核糖和葡萄糖为主要的单糖,阿拉伯糖、木糖、甘露糖和半乳糖在多数组分中未检出。相对0.01 M的盐酸水解含植酸颗粒,植酸酶可以将含植酸颗粒水解为较小分子量的组分,且会产生额外的含磷基团。植酸酶能够释放植酸中的磷酸基团,盐酸能够水解含植酸颗粒中的酯键,不能释放磷酸基团。