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本实验室克隆了中华鲟的cystatincDNA并将其连接到真核表达载体pPICZαA上,随后转化到毕赤酶母GS115细胞中,使cystatincDNA整合到酵母染色体DNA上;此重组工程菌经诱导培养可以获得高表达的重组cystatin,为探讨cystatin生理功能奠定了物质基础。为了研究重组cystatin在水产品加工、疾病防治上的应用,对重组cystatin的生理功能进行了以下几个方面的探索:
1、重组中华鲟半胱氨酸蛋白酶抑制剂的制备。通过Bradford法及凝胶薄层扫描测得重组cystatin的表达量为每升培养基215mg,约占培养基上清总蛋白量的76.3%。
2、重组cystatin对鱼糜中肌浆球蛋白(myosin)的保护作用,结果表明:添加重组cystatin可使肌浆球蛋白受内源性组织蛋白酶降解的作用得到有效缓解,说明cystatin对肌浆球蛋白具有保护作用。
3、重组cystatin对组织蛋白酶B(cathepsinB)的抑制作用,结果表明,荧光强度与加入的重组cystatin的量成反比。由测到的数据得出cystatin对cathepsinB的抑制曲线为:y=-0.249x+6.2018,说明重组cystatin对组织蛋白酶有抑制活性。
4、重组cystatin对水产致病菌的作用试验。结果表明,重组cystatin对水产养殖常见病原菌嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)、温和气单胞菌(Aeromonassobria)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、粘质沙雷菌(Serratiamarcescens)、摩氏摩根菌(Morganellamorganii)等的抑菌效果不明显。