IFN-γ、CD双顺反子表达载体的构建及在大肠杆菌中的高效表达

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用基因重组方法将人γ-干扰素(IFN-γ)cDNA片段用EcoRI,Sal I插入到原核表达载体pGI中,将重组质粒pGIFN转化大肠杆菌JF1125,构建了IFN-γ原核表达工程菌。经温度诱导培养后,SDS-PAGE光密度扫描证实重组IFN-γ表达量占菌体总蛋白的58%以上。同时,通过PCR方法克隆出大肠杆菌HB101胞嘧啶脱氨酶(CD)基因,前端引入SD序列后构建原核表达载体pGCD,转化大肠杆菌JF1125后经温度诱导,SDS-PAGE显示重组CD表达量占菌体总蛋白的47%以上。在以上研究基础上,将IFN-γ cDNA片段插入pGCD质粒CD基因前的EcoR I、Sma I位点间,构建高效表达的双顺反子表达载体pGIFN-CD。经温度诱导该系统可以高效非融合分离表达重组IFN-γ和重组CD,表达量分别古菌体总蛋白的33%和35%以上。这一体系的建立为研究IFN-γ和CD联合治疗肿瘤提供了基础。
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