乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率逐年上升，而死亡率居高不下。目前，乳腺癌的治疗仍然以手术为主，辅以放疗和化疗，但是，总的治疗效果仍不十分理想。自上世纪90年代以来，随着分子生物学和肿瘤免疫学研究的不断进展，以肿瘤免疫治疗为基础的肿瘤生物治疗已经成为继手术、放疗和化疗后的第四种肿瘤治疗模式，并具有创伤小和针对性强的特点，尤其对一些手术疗效不佳的肿瘤不失为一种好的选择。　　 近年来，肿瘤相关抗原的研究已经成为肿瘤免疫治疗研究的热点。在已知的众多肿瘤相关抗原中，癌睾丸抗原(CTA)因其特异的表达模式，即在各种肿瘤组织中有不同频率的表达，而在正常组织中仅在睾丸生殖细胞中表达，偶在胎盘中表达，而使之成为肿瘤免疫治疗研究的热点。其中黑色素瘤抗原基因(MAGE)是首先从黑色素瘤细胞中分离出来的一大家族癌睾丸抗原，人类MAGE家族包含四个亚家族，即MAGE-A、MAGE-B、MAGE-C和MAGE-D。其中MAGE-A家族包括12个成员，分别命名为MAGE-A1～MAGE-A12，它们均定位于Xq28。除了在黑色素瘤细胞中表达外，人类多种其它组织来源的肿瘤均至少表达一种MAGE-A基因。　　 导师所在课题组一直在致力于MAGE-A家族的生物学功能及作为肿瘤特异性免疫治疗靶分子可能性的研究，前期研究结果显示，MAGE-A4表现出与该家族其它成员不同的分子生物学特性，MAGE-A4与p53家族成员之间关系密切，可通过与p53家族成员p53和p73之间直接的相互作用来诱导肿瘤细胞的凋亡。　　 本研究采用多种实验方法研究了MAGE-A4和p73蛋白在乳腺癌组织及相应乳腺正常组织中的表达；分析了MAGE-A4和p73的表达与乳腺癌临床病理学指标之间的关系及两者之间的表达相关性；研究了MAGE-A4对p73转录活性的影响，旨在为寻找乳腺癌生物治疗靶点提供实验依据。　　 第一部分乳腺癌组织中MAGE-A4和p73的表达及与乳腺癌临床病理学指标之间的关系　　 目的：通过检测肿瘤抗原MAGE-A4和肿瘤抑制因子p73在60例乳腺癌组织及相应乳腺正常组织中的表达，探讨其表达与乳腺癌临床病理学指标之间的关系及两个分子表达之间的相关性。　　 方法：采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶法(S-P)分别检测肿瘤抗原MAGE-A4和肿瘤抑制因子p73在60例乳腺癌组织及相应乳腺正常组织中的表达，并回顾性分析上述两个指标与乳腺癌临床病理学指标之间的关系，以及两个分子表达之间的相关性。　　 结果：　　 1.60例正常乳腺组织中均未发现MAGE-A4蛋白的表达，60例乳腺癌组织有38例MAGE-A4蛋白表达阳性，阳性率为63.3％，提示MAGE-A4为肿瘤特异性抗原。　　 2．MAGE-A4蛋白表达与乳腺癌临床病理学指标之间的关系MAGE-A4免疫组织化学染色阳性产物主要定位于细胞质，部分定位于细胞核。60例乳腺癌患者中，C-erbB2表达阴性(-～++)的患者32例，其中MAGE-A4表达阳性的患者24例，占75％(24/32)，C-erbB2表达阳性(+++)的患者28例，其中MAGE-A4表达阳性的患者14例，占50％(14/28)，明显低于C-erbB2表达阴性组。　　 MAGE-A4蛋白表达与乳腺癌患者的其它临床参数，如患者的年龄（x2=3.213，P=0.201）、病理类型(x2=0.030，P=0.862)、组织学分级(x2=0.951，P=0.621）、临床分期（x2=1.053，P=0.591）、肿瘤大小(x2=0.096，P=0.953)、淋巴结转移（x2=0.072，P=0.789）、ER状态（x2=0.745，P=0.388）、PR状态（x2=0.205，P=0.651）均无显著相关性。　　 3．p73蛋白在乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织中的表达p73免疫组织化学染色阳性产物主要定位于细胞质，部分定位于细胞核。60例乳腺正常组织中，51例p73蛋白表达阳性，阳性率为85％;60例乳腺癌组织中，26例p73蛋白表达阳性，阳性率43.3％。p73在乳腺癌组织中的表达率显著低于在正常乳腺组织。　　 4．p73蛋白表达与乳腺癌临床病理学指标之间的关系60例乳腺癌患者中，ER表达阴性的患者23例，其中p73表达阳性的患者6例，占26.1％(6/23)，ER表达阳性的患者37例，其中p73表达阳性的患者20例，占54.1％(20/37)，明显高于ER表达阴性组。60例乳腺癌患者中，PR表达阴性的患者25例，其中p73表达阳性的患者7例，占28％(7/25)，PR表达阳性的患者35例，其中p73表达阳性的患者19例，占54.3％(19/35)，明显高于PR表达阴性组。　　 p73分子表达与乳腺癌患者的其它临床参数，如患者的年龄(x2=0.941，P=0.625）、病理类型(x2=0.747，P=0.387)、组织学分级(x2=2.390，P=0.303)、临床分期（x2=0.06，P=0.997）、肿瘤大小(x2=1.15，P=0.563)、淋巴结转移（x2=0.271，P=0.602）、C-erbB2状态(x2=0.350，P=0.554)均无显著相关性。　　 5．乳腺癌组织中MAGE-A4与p73蛋白表达之间的相关性在34例p73蛋白表达阴性的乳腺癌组织中，有17例MAGE-A4分子表达阳性，阳性率为50％(17/34)，26例p73蛋白表达阳性的乳腺癌组织中，有21例MAGE-A4蛋白表达阳性，阳性率为80.8％(21/26)，明显高于p73蛋白表达阴性组，提示MAGE-A4蛋白表达与p73蛋白表达之间存在正相关。　　 结论：　　 1．正常乳腺组织中不表达MAGE-A4蛋白，乳腺癌组织中MAGE-A4蛋白表达率为63.3％，提示MAGE-A4为肿瘤特异性抗原。C-erbB2表达阳性的乳腺癌组织中，MAGE-A4表达阳性率明显低于C-erbB2表达阴性的乳腺癌患者。　　 2．p73在乳腺癌组织中的表达阳性率显著低于正常乳腺组织。p73的表达与乳腺癌特征性的生物学指标ER和PR相关。　　 3．MAGE-A4蛋白表达与p73蛋白表达之间存在正相关关系。　　 第二部分乳腺癌细胞中MAGE-A4对p73转录活性的影响　　 目的：探讨MAGE-A4对p73转录活性的影响。　　 方法：选用p53突变型人肺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231，采用细胞培养、基因转染、RT-PCR、Western-blot等方法研究MAGE-A4对p73转录活性的影响。　　 结果：　　 1．MAGE-A4与p73在人乳腺癌细胞中的表达RT-PCR和Western-blot分析结果显示，MAGE-A4在人乳腺癌细胞MCF-7及MDA-MB-231中的表达均为阴性。p73在以上两种细胞中的表达均为阳性，且在MCF-7中的表达高于其在MDA-MB-231中的表达。　　 2．MAGE-A4对p21mRNA表达的影响MDA-MB-231细胞转染HA-pcDNA3-p73表达质粒之后，p21mRNA的表达水平明显高于转染空载体组，共转染HA-pcDNA3-p73表达质粒和pCMV6-AC-GFP-MAGE-A4表达质粒之后，p21mRNA的表达水平明显高于单独转染HA-pcDNA3-p73表达质粒组，由于p21是p53和p73的共同靶基因，而MDA-MB-231为p53突变型乳腺癌细胞，因此提示，MAGE-A4可增加p73的转录活性。　　 结论：MAGE-A4可以增加p73的转录活性。