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牛轮状病毒(bovine rotavirus, BRV)和牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)是两种引起牛的病毒性腹泻疾病的重要病原体。BVDV广泛存在于牛群中,给全世界的养牛业造成了巨大的损失。流行病学调查显示,牛群中BVDV的感染率为30-95%。根据感染病毒时期的不同,可以造成胚胎死亡、流产、木乃伊胎以及造成犊牛的持续性感染和剧烈腹泻,严重时可能发展成为致死性粘膜病。BRV是呼肠孤病毒科,轮状病毒属病毒,可引起犊牛剧烈腹泻、脱水,严重时导致死亡。据国外资料显示,轮状病毒引起犊牛腹泻的发病率为60~80%,死亡率为0~50%。首先,根据发表的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5’-UTR序列,设计一对特异性引物,建立了快速检测BVDV的RT-PCR方法。利用该方法能从BVDV中扩增出196bp特异性目的片段。应用此方法检测了26份疑似病例临床样品,14份为阳性。试验表明,该方法特异性强敏感性好,能检测到1pg的病毒RNA,是一种快速准确的检测方法。然后,本试验建立了能够同时检测牛轮状病毒(BRV)与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的双重RT-PCR方法。应用两对特异性引物进行了双重RT-PCR扩增,这两对引物分别对应于BRV的VP7基因和BVDV的5-UTR中的部分序列,其扩增产物分别为342bp和196bp。试验证明此方法的特异性强敏感性高,可检测到1pg的病毒RNA,可应用于临床诊断和流行病学研究。其次,本研究制备了牛轮状病毒甲醛灭活疫苗,以小鼠和兔子为模型检测其免疫原性。将本室分离鉴定的牛轮状病毒野毒株(CHLY株)在恒河猴肾细胞系(MA-104)上增殖,制备病毒抗原液。当病毒的感染力达到106TCID50/ml以上时,甲醛灭活,并分别制备油乳佐剂疫苗和铝胶佐剂疫苗,然后免疫试验动物,检测疫苗的免疫原性。小鼠免疫试验结果表明,第二次免疫后所有免疫组均产生了高水平IgG抗体,与对照组差异极显著(P<0.01),油乳佐剂疫苗与铝胶佐剂疫苗免疫效果差异不显著(P>0.05);兔免疫试验中,免疫组母兔产下仔兔血清中含有高水平的牛轮状病毒特异性抗体,与对照组差异极显著(P<0.01)。试验表明制备的牛轮状病毒甲醛灭活疫苗具有较好的免疫原性,免疫后可显著提高体内特异性抗体水平。最后,将研制的牛轮状病毒灭活疫苗免疫孕牛后,研究产下犊牛通过母源抗体获得的被动免疫在预防牛轮状病毒感染中的作用。孕牛产前2月和1月分别接种牛轮状病毒灭活疫苗,检测产牛后乳汁和犊牛血样中BRV特异性IgG、IgA及中和抗体滴度。犊牛21日龄时口服2ml106.59TCID50/ml的牛轮状病毒,观察犊牛腹泻及排毒情况。结果表明,免疫组乳清和犊牛血清中产生了高水平的牛轮状病毒特异性IgG、IgA及中和抗体,与对照组差异极显著(P<0.01);攻毒后,对照组6头犊牛全部发生腹泻,免疫组6头中有1头腹泻,发病的潜伏期及发病率差异显著。