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产志贺毒素的大肠杆菌,包括0157血清型和非0157血清型,是世界流行的三大主要食源性致病菌之一。大肠杆菌O157:H7容易导致腹泻、肠出血及溶血性尿毒综合症,严重的可导致死亡。因此,建立一种灵敏度高、特异性强的检测方法,对于该菌的预防控制具有重要意义。大肠杆菌O157:H7的检测方法多种多样,传统的方法大多耗时费力,难以推广使用。免疫层析方法以其检测快速、操作简便、灵敏度高等特点获得了越来越多的关注。本文采用恒温回流法和传统加热煮沸法两种方法合成纳米金溶液。并将合成的纳米金用于标记鼠抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体,制备大肠杆菌0157:H7试纸条,用于大肠杆菌0157:H7的检测。恒温回流法制备了五种不同大小的纳米金溶液,试纸条检测结果显示,试纸条灵敏度随着纳米金粒径的增大先增大后减小。粒径为35 nm,紫外最大吸收峰波长为526 nm的纳米金溶液的灵敏度最高,能检测2.8×102CFU/mL菌液。加热煮沸法制备的纳米金溶液的检测灵敏度为 2.8×104 CFU/mL 菌液。两种分散度不同但紫外最大吸收峰波长均为526 nm的纳米金溶液按不同的比例进行混合,配制成五种不同分散度的纳米金溶液。将这些配制的纳米金溶液用于标记鼠抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体,制备大肠杆菌0157:H7试纸条,用于大肠杆菌O157:H7的检测。结果表明,当纳米金分散系数由0.2增大到0.6,灵敏度由 2.8×1 02 CFU/mL 变为 2.8×105 CFU/mL。CMHG分子通过一端巯基与纳米金颗粒形成金巯基键,另一端羧基与鼠抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体中的氨基反应形成肽键,制备纳米金-PEG-抗体复合物。结果表明,通过CMHG作为桥梁结合纳米金和抗体的标记方法检测灵敏度能够达到102CFU/mL。这种用CMHG修饰过的纳米金偶联抗体之后不需要加封闭剂,试纸条中的硝酸纤维素膜也不需要封闭过程,CMHG包裹在纳米金表面修饰纳米金,从根本上阻止了纳米金表面裸露的位点与试纸条的NC膜上蛋白的非特异性反应的发生。