【摘 要】
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粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一种能在干细胞、祖细胞和成熟细胞不同水平上促进嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和单核-巨噬细胞生成和功能十分重要的造
【出 处】
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白求恩医科大学 吉林大学白求恩医学部 吉林大学
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粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一种能在干细胞、祖细胞和成熟细胞不同水平上促进嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和单核-巨噬细胞生成和功能十分重要的造血因子.根据近来基因结构和功能研究的资料,即5-UTR的改变和起始密码子ATG上或下游序目显著影响着外源基因在E.coli中的表达效率的线索,为了提高G-CSF的表达水平,作者利用多聚酶链反应的手段,构建了不同SD-1TG的质粒表达载体,分别命名为PDGM1、PDGM2和PDGM3,并使这些质粒在大肠杆菌中进行了表达,证明PDGM3在大肠杆菌HB101中表达的最好.然后在不同菌种和不同诱导表达时间上对表达质粒PDGM3的表达条件进行了优化.进一步作者选择了最佳条件对表达菌进了发酵,对GM-CSF蛋白进行了表达、纯化和生物学活性测定.结果表明,不同SD序列与超始密码子ATG之间的距离对G-CSF的表达水平有较大的影响,从原来的低表达提高到目前的约白菌体蛋白20-30%,实现了高表达的设想.
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