5Aza-dc联合阿霉素对骨肉瘤细胞株MG63抑制作用的研究

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目的:1、5Aza-dc与化疗药物联合应用于MG63骨肉瘤细胞,探讨二者间的协同作用,增强化疗药物疗效;2、5Aza-dc对MG63骨肉瘤细胞的RASSF1A基因甲基化水平的影响;3、5Aza-dc对MG63骨肉瘤细胞的RASSF1A蛋白表达的影响。方法:对人骨肉瘤细胞株MG63应用去甲基化剂5-氮-2′-脱氧胞苷(5Aza-dc)诱导处理;1、应用MTT方法,检测5Aza-dc及ADM单独及联合用药对MG63细胞存活率的影响;2、应用流式细胞仪观察细胞凋亡率的变化;3、应用MSP方法,比较5Aza-dc处理前后RASSF1A基因甲基化状态;4、采用Western blot方法,对5Aza-dc处理前后RASSF1A基因蛋白表达水平进行分析。结果:1、MTT法及流式细胞术检测,5Aza-dc浓度分别为2.0、4.0和8.0μmol/L,在一定范围内随着剂量的增高,对MG63细胞增殖的抑制作用越明显,5Aza-dc作用48h,MG63细胞存活率分别为84.6%、61.8%、42.6%。流式细胞仪检测,5Aza-dc可以显著增高MG63细胞的凋亡率,作用呈剂量依赖性,在浓度达到8.0μmol/L时效果最明显。2、MSP,Western blot显示在应用5Aza-dc处理前,MG63细胞RASSF1A基因呈甲基化状态,RASSF1A基因蛋白表达缺失,经2.0、4.0及8.0μmol/L的5Aza-dc作用48h后,MSP显示MG63细胞RASSF1A基因甲基化逆转;Western blot显示RASSF1A基因蛋白表达恢复。3、5Aza-dc与ADM协同可显著增强对MG63细胞的杀伤作用。经MTT检测,8μg/mL,16μg/mL,32μg/mL,64μg/mL的ADM作用48h,MG63细胞存活率分别为90.4%、81.8%、70.1%、59.5%,加入终浓度为2.0μmol/L的5Aza-dc后,相同条件下细胞的存活率降为83.2%、70.8%、42.6%和33.6%。结论:1、5Aza-dc能较好地逆转MG63骨肉瘤细胞的DNA异常甲基化,激活因高甲基化所致RASSF1A基因沉默的再转录,诱导该基因的表达。2、5Aza-dc能有效的诱导MG63骨肉瘤细胞凋亡。3、5Aza-dc与ADM有协同作用,增强MG63骨肉瘤细胞对化疗药物的敏感性。
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