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鸡传染性法氏囊病(Infectious BursaL Disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡的一种高度接触性传染病。病毒在法氏囊的B淋巴细胞中迅速繁殖,损伤法氏囊的B淋巴细胞,引起严重的免疫抑制,对养鸡业造成严重的经济损失。IBDV属于双RNA病毒科的成员,病毒基因组由A,B两个片段的双股RNA组成,其中,结构蛋白VP3是由基因组A片段编码的。 B细胞抗原表位义称抗原决定簇,是抗原分子上能够被抗体分子识别的部位,在蛋白质抗原中一般由几个直接相邻或构象上相邻的氨基酸组成,决定着机体产生抗体的特异性,是诱导体液免疫的基本单位。对以体液免疫反应为主的IBDV来说,鉴定其B细胞抗原表位便是揭示IBD体液免疫的本质。 本项研究应用基因工程技术构建了VP3基因原核表达载体pETVP3,并在大肠杆菌中诱导表达了鸡IBDV主要结构蛋白VP3。表达蛋白能够与鸡IBDV抗血清发生特异性反应,应用该表达蛋白初步鉴定了VP3B细胞抗原表位。 在应用生物信息学原理分析鸡IBDV VP3蛋白结构特性的基础上,合成了VP3 20-mer重叠多肽28条,VP3 12-mer重叠多肽30条,合成多肽与载体蛋白BSA偶联后,经peptide-ELISA和Dot-ELISA检测其与鸡IBDV多抗的反应性。结果显示,VP3中含有6个EP6:728PRDWDRLPYLNL739;ES7:818LANAPQAGSKSQRA831;ES8:851QREKDTRISKKMETMGIYFATP872,ES9:876ALNGHRGPSPGQLKYWQNTRE1897;ES10:961QMKDLLLTAMEMK973;EP7:982PKPKPKPNAPTQ993多抗反应位点 通过本项研究,绘制了鸡IBDV VP3蛋白的抗原表位图谱,对揭示IBDV体液免疫产生的本质具有重要意义,同时为设计IBDV新型表位疫苗及研制IBDV特异性检测试剂奠定了基础。