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杆状病毒是特异性感染节肢动物的病毒类群。在杆状病毒的生命周期中存在广泛的病毒与宿主的相互作用。蛋白质-蛋白质相互作用是病毒与宿主相互作用的重要途径。ODV-E25和PP31是杆状病毒的两种重要蛋白质。ODV-E25是病毒体的包膜蛋白。odv-e25基因是杆状病毒核心基因之一，存在于所有已完成测序的杆状病毒基因组。PP31是一种磷酸化的DNA结合蛋白，定位于病毒发生基质。pp31基因存在于所有已完成测序的鳞翅目昆虫杆状病毒。目前对ODV-E25和PP31在病毒复制周期中的作用尚无深入了解。本研究试图从这两种蛋白与宿主细胞蛋白相互作用的角度研究其功能。
1、采用SMART技术从苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒Autographa californicamultiple nucleopolyhedrovirus(AcMNPV)感染的S19细胞提取和纯化总RNA，通过反转录合成cDNA，经过LD-PCR扩增后与pGADT7载体共转化AH109酵母菌株，构建与酵母GAL4 AD结构域融合的cDNA文库。对随机取样的cDNA克隆的PCR扩增检验结果显示，该文库展现出良好的多态性，载体质粒插入的cDNA片段大小分布在0.25～2.1kb之间。文库的滴度为6.735×108 cells/ml。
2、以odv-e25为诱饵从上述Sf9细胞cDNA文库中筛选相互作用蛋白基因。通过酵母双杂交实验，从中筛选出121个阳性克隆。这些阳性克隆根据序列分析结果归类于10个不同的cDNA序列。BLAST检索分析结果显示其中两个cDNA序列的预期编码产物分别与一种家蚕线粒体核糖体蛋白和一种甘油醛-3-磷酸脱氢酶同源。
3、本实验室在前期研究工作中从小菜蛾幼虫cDNA文库中筛选出多个编码可能与小菜蛾颗粒体病毒Plutella xylostella granulovirus(PlxyGV)PP31相互作用蛋白的cDNA克隆，其中包括编码蛋白激酶C受体(RACK)的序列。在此基础上，本研究完成了小菜蛾RACK和PlxyGV PP31的原核表达和纯化以及这两种蛋白的GSTPull-down实验分析。实验结果显示，在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的RACK-His是一个38KD多肽。在GST Pull-down实验中，RACK蛋白随同GST-PP31融合蛋白一起吸附于GST亲和树脂。此实验结果进一步证实了PlxyGV PP31与小菜蛾RACK蛋白的相互作用。