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本研究采用生物活性追踪法,对9种植物的乙醇提取物进行抑菌活性筛选,8种植物的乙醇提取物进行除草活性筛选,筛选出荆条花乙醇提取物具有较好抑菌和除草活性。证明荆条花中含有抑菌和除草活性成分,通过进一步的分离,纯化,最终得到抑菌活性化合物A和B,经核磁和质谱对其进行了结构测定。本研究主要取得了如下结果:
1.以苹果腐烂病菌、小麦赤霉病菌、苹果轮纹病菌、棉花枯萎病菌、柑橘炭疽病菌和黄瓜枯萎病菌为供试菌种,采用菌丝生长速率法测定了9种植物乙醇提取物对6种植物病原真菌的抑制作用。结果表明,在浓度为5mg/mL时,荆条花乙醇提取物对6种植物病原真菌均有一定程度的抑制作用,其中对苹果腐烂病菌、棉花枯萎病菌、苹果轮纹病菌和黄瓜枯萎病菌的抑菌率分别为91.07%、72.97%、64.54%和63.20%。采用抑制孢子萌发法测定了9种植物乙醇提取物对2种植物病原真菌的抑制作用。结果表明,浓度为20mg/mL时,雪松和仙鹤草叶乙醇提取物对黄瓜枯萎病菌和柑橘炭疽病菌的孢子抑制率为100%。
2.采用平皿法,以反枝苋、黄瓜、生菜和稗草为供试植物,测定了8种植物乙醇提取物的除草活性。结果表明,在浓度为10mg/mL时,8种植物乙醇提取物对4种植物幼苗生长均有一定的抑制作用,荆条花的抑制作用最好,其中荆条花对反枝苋、黄瓜、生菜和稗草的幼苗的幼根的抑制率分别为94.76%、34.56%、84.17%和94.50%。对幼茎的抑制率分别为85.21%、6.44%、80.70%和46.60%。
3.采用生长速率法测定了荆条花粗提物对植物病原菌的抑制作用。结果表明,在供试浓度为5mg/mL时,花乙醇提取物对苹果腐烂病菌、白菜黑斑病菌、番茄早疫病菌和棉花枯萎病菌的抑菌率均在70%以上。花乙醇提取物不同溶剂萃取物中,石油醚层和乙酸乙酯层的抑菌活性较高。石油醚和乙酸乙酯萃取物对苹果腐烂病菌和白菜黑斑病菌的EC50分别为0.32mg/mL、0.45mg/mL;0.23mg/mL和0.20mg/mL。
4.采用琼脂混粉法测定了荆条不同器官对反枝苋、苘麻、生菜、黄瓜、稗草和小麦6种受体植物的除草活性。结果表明,在10mg/mL的供试浓度下荆条不同器官粉末对6种植物幼苗均有明显的抑制作用,且以花活性最高;进一步测定了花的乙醇提取物及各萃取物对6种植物幼根和幼苗的有效中浓度EC50,结果表明:乙酸乙酯层的活性最好,石油醚层次之。
5.对石油醚萃取层进行硅胶柱色谱,得到19个馏分,以白菜黑斑病菌、苹果腐烂病菌、葡萄白腐病菌、棉花枯萎病菌、葡萄黑痘病菌对各馏分进行活性测定,其中10、13和14号活性最好,对其馏分10进行进行多次柱色谱,分离得到了白色晶体化合物A和B,并对其进行活性测定。化合物A对苹果腐烂病菌、葡萄白腐病菌和白菜黑斑病菌的EC50分别为0.10、0.27和0.14mg/mL。通过光谱鉴定,化合物A为豆甾-5,22-二烯-3β-醇;化合物B对苹果腐烂病菌、葡萄白腐病菌和白菜黑斑病菌的EC50分别为0.48、0.30和0.42mg/mL。通过光谱鉴定,化合物B为豆甾-7,22-二烯-3β-醇。
6.通过对溶剂和乳化剂进行筛选,配制得到10%荆条花乙醇提取物可溶性液剂,并对该制剂进行了室内生测。结果表明,10%荆条花乙醇提取物可溶性液剂对苹果腐烂病菌、葡萄白腐病菌和黄瓜枯萎病菌的EC50分别为5.97、53.86和395.46mg/L;荆条花乙醇提取物对苹果腐烂病菌、葡萄白腐病菌和黄瓜枯萎病菌的EC50分别为1.66、2.43和2.31mg/mL。荆条花乙醇提取物配成可溶性液剂后,抑菌率大大提高了,但是和成品药剂多菌灵相比还有一定的差距。