目的研究恶性黑色素瘤组织中线形程序性坏死(linearly patterned programmed cell necrosis, LPPCN)的分布及其形态学特点,并探讨其临床病理意义。初步分析LPPCN发生的相关分子机制及其与血管生成拟态(Vasculogenic mimicry, VM)和内皮依赖性血管(Endothelium dependent vessel, EDV)形成的相关性。方法1.应用形态学分析方法观察恶性黑色素瘤中LPPCN的存在及其分布特点,并探讨其临床病理意义。自1996-2007年天津医科大学附属肿瘤医院存档石蜡标本中,挑选出经手术切除的、病理诊断明确且随访资料完整的恶性黑色素瘤标本共70例,每例标本均进行HE切片后由有经验的病理医师核实临床病理诊断,进一步观察LPPCN的形态特点并分析LPPCN的分布和临床病理意义。2.采用免疫组织化学方法初步分析黑色素瘤中LPPCN的发生机制及其与血管新生的相关性。检测黑色素瘤组织中Ⅲ型磷脂酰肌醇三磷酸激酶(ClassⅢPI3K)的表达情况,分析LPPCN与自噬的相关性。检测组织中基质金属蛋白酶2、9(Matrix metalloproteinase2、9, MMP2、MMP9)、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)、组织蛋白酶D (CathepsinD, CathD)、CD105、TGFβ1、p-paxillin、Ⅷ因子相关抗原(Ⅷ-R Ag)及D2-40等蛋白的表达情况,同时进行CD31/PAS双重染色计数血管生成拟态密度(Vasculogenic mimicry density, VMD),从而分析LPPCN与VM、内皮依赖性血管及淋巴管形成的相关性。3.利用实时荧光定量PCR (Real-time PCR)检测LPPCN阳性组与阴性组中相关基因mRNA的表达差异,分析它们与LPPCN的关系。收集天津医科大学附属肿瘤医院组织库2005年至今新鲜冻存标本黑色素瘤组织30例,通过冰冻切片HE染色观察其中是否存在LPPCN,将其分为LPPCN阳性组与LPPCN阴性组。利用Real-time PCR检测两组中目的基因ClassⅢPI3K、TGFβ1的表达差异,从mRNA的水平分析LPPCN的发生机制及其与血管生成的相关性。结果1.黑色素瘤中LPPCN的形态学分布特点及其临床病理意义黑色素瘤标本中LPPCN阳性率为54.29%(38/70),LPPCN在HE镜下形态为一簇胞质浓缩、胞核深染的肿瘤细胞,呈线形或网状分布。LPPCN阳性率在不同的肿瘤大小、核分裂像数目及breslow厚度之间差别均具有统计学意义,而与性别、年龄、部位、有无瘤栓、淋巴结转移及复发与远处转移均无关。患者的生存率在LPPCN阳性组低于阴性组(P=0.046)。2.免疫组化染色结果分析在黑色素瘤组织中,LPPCN阳性组ClassⅢPI3K、CD105标记的微血管密度(microvessel density, MVD)、TGFβ1、Ⅷ-R Ag-MVD、VMD及MMP2表达高于LPPCN阴性组,差别均具有统计学意义(P<0.05)；而D2-40标记的微淋巴管密度(lymphvessel density, LVD)、MMP9、CathD在两组间表达差异无统计学意义(P＞0.05); ClassⅢPI3K、TGFβ1在发生LPPCN的肿瘤细胞中的表达高于周围的肿瘤细胞,差异具有统计学意义(P<0.05)。CD105与TGFβ1的表达呈正相关；CD105-MVD、Ⅶ-R Ag-MVD及VMD均与LPPCN的密度呈正相关。p-paxillin在黑色素瘤组织中呈普遍低或无表达,也可见其在部分血管内皮细胞中表达。VM阳性组MMP2、MMP9表达高于VM阴性组,差异具有统计学意义(P<0.05)；且TIMP-1在VM阳性组的表达低于VM阴性组,差异具有统计学意义(P＜0.05); CathD在两组间差异无统计学意义(P>0.05)。同时本实验结果提示D2-40标记的LVD在淋巴结转移阳性组高于阴性组,差别均具有统计学意义(P<0.05)。3. Real-time PCR结果分析Real-time PCR结果显示,在恶性黑色素瘤组织中,LPPCN阳性组中ClassⅢPI3K、TGFβ1mRNA表达均高于LPPCN阴性组,与免疫组化结果趋势一致,但仅TGFβ1mRNA表达量在两组间的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.恶性黑色素瘤中存在LPPCN及VM,具有LPPCN及VM的患者预后差。2. LPPCN可能为肿瘤细胞发生的自噬现象,其与黑色素瘤中VM及内皮依赖性血管的形成关系密切,其机制可能是肿瘤细胞发生LPPCN可为血管新生提供—定的空间结构基础。3.本研究未显示LPPCN与淋巴管生成的相关性。D2-40作为一种新的特异性较强的淋巴管内皮标志物,其与黑色素瘤患者淋巴结转移密切相关。