周期性反季节水淹是影响三峡库区消落带生态的主要环境因子,而植被修复是消落带生态治理的主要策略。桑树因其抗旱耐涝、耐盐渍等生理优势,成为消落带植被恢复的理想建设型树种,但长时间的水淹导致新植生命力受损、存活率降低,严重阻碍了其在植被生态修复上的应用。内生菌可以促进植物生长,增强宿主对生物或非生物胁迫的耐受性。本研究从实验室分离保存的桑树内生菌资源,筛选获得一株促生抗逆潜能优异的内生细菌HLG18,对其进行了菌种鉴定和基本生物学特性研究,并评估其对家蚕和小鼠的安全性,最后利用温室盆栽探究该菌对桑苗生长和抗涝能力的影响;结合该菌对土壤理化性质、桑苗细菌群落多样性及抗逆相关物质的影响,初步探究该菌的促生或抗逆机制。1.桑树功能内生菌的筛选和鉴定本研究从实验室分离保存的桑树内生菌资源中,以产IAA和溶磷能力为评价指标,筛选出一株内生细菌HLG18。菌种鉴定显示,菌株HLG18为革兰氏阴性菌,其菌落在LB培养基呈湿润、乳白色、圆形;可氧化利用葡萄糖、麦芽糖和甘露醇等。16S r DNA序列的系统发育树显示,该菌与Pseudomonas koreensis处于同一最小分枝。综上,将菌株HLG18鉴定为Pseudomonas koreensis,命名为P.koreensis HLG18。进一步评价该菌的促生抗逆潜能,发现P.koreensis HLG18还具有固氮、产铁载体、纤维素酶和ACC脱氨酶等能力。2.P.koreensis HLG18的生物学特性及安全性研究P.koreensis HLG18生长的最佳碳源和氮源分别为葡萄糖和胰蛋白胨、最适生长温度为25℃、最适p H为6.0,对Na Cl和H2O2具有一定的耐受性,并对多种植物病原菌具有拮抗作用。安全性实验结果显示,P.koreensis HLG18对家蚕的存活率、蛹重和茧层率等均无显著影响;P.koreensis HLG18菌悬液灌胃小鼠后,小鼠的体重变化、脏器指数、血常规指标及肝肾功能与对照组相比均无显著差异。由此说明,P.koreensis HLG18对家蚕及小鼠的生长发育无负面影响。3.P.koreensis HLG18对桑苗的促生作用研究P.koreensis HLG18处理后的桑苗,其株高、根长、根尖数和根系投影面积等均显著高于对照组,而地上部分鲜重和干重、地下部分的鲜重和干重也显著提高了224.51%和181.62%、242.31%%和330.49%,表明该菌可以促进桑苗生长。此外,接种P.koreensis HLG18可以显著降低土壤中全钾和速效钾的含量,比例分别为5.04%和21.90%。桑苗细菌群落多样性分析结果表明,P.koreensis HLG18对桑苗根际土壤、根和茎细菌群落的α-多样性无显著影响,但影响了桑苗内生细菌群落的β-多样性。在属水平上,处理组根部的Rhizorhapis、Caulobacter和Bacillus等菌群,以及茎部的Methylobacterium-Methylorubrum和TM7a的相对丰度均显著高于对照组。此外,在处理组根部显著富集的Rhizorhapis和Caulobacter与桑苗的根尖数呈显著正相关,而Bacillus与根长呈显著正相关。4.P.koreensis HLG18提升桑苗抗涝性能的研究在根淹和没顶水淹条件下,接种P.koreensis HLG18可以减少桑苗的倒伏和叶片受损程度,该菌也可以显著提高桑苗的冠幅、并有效降低落叶率。伊文思蓝染色结果亦表明,接种P.koreensis HLG18可以缓解根淹和没顶水淹胁迫对叶片和根尖细胞的损伤。叶片抗逆物质的检测结果显示,处理组桑苗的可溶性糖和可溶性蛋白含量,以及超氧化物歧化酶和过氧化物酶的活性均高于对照组,其中超氧化物歧化酶活是对照组的1.53倍（根淹）和2.96倍（没顶水淹）。同时,P.koreensis HLG18可以降低有害物质丙二醛的含量。在根淹和没顶水淹恢复后,接种P.koreensis HLG18可以显著提高桑苗地上/下部鲜重、根尖数和根系投影面积,其中根系投影面积分别提高了112.89%（根淹）、56.75%（没顶水淹）。综上所述,桑树内生菌P.koreensis HLG18具有溶磷、固氮,产IAA等特性,对Na Cl和H2O2具有一定的耐受性,对多种植物病原菌具有拮抗作用,且该菌对小鼠和家蚕的生长发育无负面影响。同时,接种P.koreensis HLG18对桑苗的生长具有明显的促进作用,并影响土壤理化性质和内生细菌群落组成;此外,P.koreensis HLG18可以提高桑苗抗涝的能力,并诱导桑苗调节渗透物质含量以及提高抗氧化酶活。因此,P.koreensis HLG18是一株可以促进桑苗生长、提高其抗涝能力的功能菌株。本研究结果为利用桑树内生菌促进三峡库区消落带植被恢复提供优质微生物资源及理论支撑。