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近年来随着国家对健康养殖、安全养殖的要求逐渐提高,对于水产养殖中用药的规定和限制越来越严格。微生态制剂越来越受到重视。微生态制剂是由一种或者多种细菌制成的产品,一般直接添加到水体中或者添加到饲料中。具有调控水质、提高养殖动物产量、抑制病菌生长、减少病害等作用。微生态制剂产生作用的机制一般认为有以下几个方面:1.通过细菌间的拮抗作用抑制环境和动物体内的病菌生长。2.刺激养殖动物的免疫,提高抗病力。3.分泌酶类、氨基酸、寡糖等物质促进动物的生长代谢,提高产量。4.通过吸收水体中的氨氮、亚硝氮,以及分泌高分子分泌物吸附水中重金属和颗粒改善水质。对于投喂细菌能够提高水产动物免疫力的研究已有很多,然而对于细菌免疫调控的机制仍不清楚。目前人们认为主要通过三个个方面:首先是通过改变肠道的菌群结构,减少病菌的数量从而减少动物的发病,其次细菌中可能存在能够提高动物免疫水平的物质被动物吸收利用从而提高了动物的抗病力,另外细菌分泌的消化酶、营养物质等改善了动物的体质从而提高了抗病力。 本论文的主要研究内容为:1.饲料中添加芽孢杆菌和溶藻弧菌对凡纳滨对虾消化、免疫及抗病力的影响。2.饲料中添加芽孢杆菌不同组分对对虾生长、免疫酶和抗病力的影响。3.溶藻弧菌VZ5和芽孢杆菌BZ5胞内多糖的提取、纯化和性状鉴定。本论文的主要研究结果如下: 1.饲料中添加芽孢杆菌和溶藻弧菌对凡纳滨对虾消化、免疫及抗病力的影响 以配合饲料为对照,在饲料中分别添加溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)活菌,溶藻弧菌破碎菌,芽孢杆菌(Bacillus sp.)活菌,芽孢杆菌破碎菌,使其菌含量为108CFU/g,研究饲料中添加芽孢杆菌和溶藻弧菌对凡纳滨对虾消化酶、免疫相关酶和抗病力的影响。实验结果显示:1)各处理组对虾的增重率、特定生长率和成活率无显著差异。2)4个菌添加处理组对虾的肠道蛋白酶水平均显著高于对照组。25d时各处理组淀粉酶水平均显著高于对照组,49d时弧菌破碎组和杆菌破碎组对虾的淀粉酶水平高于对照组(P<0.05),其中杆菌破碎组对虾肠道的消化酶水平最高,杆菌组对虾肠道消化酶水平低于其他处理组。3)49d时弧菌组对虾的超氧化物歧化酶(SOD)水平高于对照组(P<0.05);弧菌破碎组对虾的SOD、酚氧化酶(PO)和抗菌酶水平高于对照组(P<0.05);杆菌组对虾PO水平高于对照组,抗菌酶水平下降(P<0.05);杆菌破碎组对虾 SOD和 PO水平均高于对照组,抗菌酶水平下降(P<0.05)。4)WSSV攻毒的半致死时间为杆菌破碎组>弧菌破碎组>弧菌组>杆菌组>对照组。上述结果表明,饲料中添加芽孢杆菌和溶藻弧菌及其破碎菌体均能在一定程度上提高对虾的消化酶活力和抗病力。其中添加弧菌破碎菌体能更好的提高对虾的免疫酶水平,添加杆菌破碎菌体能促进对虾消化和抗病力。 2.饲料中添加芽孢杆菌不同组分对对虾生长、免疫酶和抗病力的影响 以配合饲料为对照,在饲料中分别添加芽孢杆菌(Bacillus sp.)活菌,芽孢杆菌胞外产物、芽孢杆菌胞壁碎片、芽孢杆菌胞内产物,按照菌含量为108CFU/g的比例添加,研究饲料中添加芽孢杆菌及其细胞产物对凡纳滨对虾生长、免疫相关酶和抗病力的影响。实验结果显示:1)各组对虾的增重率无显著差异(P>0.05)。活菌组的产量显著低于其他各组,胞壁组的成活率显著高于其他各组但是产量并无显著差异。2)活菌组的SOD、POD、PO活性均显著高于对照组。胞内组的POD水平和活菌组一样一直处于一个较高的水平,SOD和PO水平一开始较低,到养殖后期SOD和POD水平均高于活菌组,PO水平相比活菌组较低(P<0.05)。胞外组的POD水平显著高于对照组并在养殖末期高于活菌组,SOD值则在末期与对照组无显著差异,PO活力显著高于对照组而低于活菌组(P<0.05)。胞壁组的 SOD在养殖中期有显著上升,然而在养殖末期下降并显著低于对照组(P<0.05)。3)WSSV攻毒的半致死时间为胞内组>活菌组>胞壁组>对照组>胞外组。上述结果表明,饲料中添加芽孢杆菌的胞内产物能够有效的提高凡纳滨对虾的免疫水平及抗病力。 3.溶藻弧菌VZ5和芽孢杆菌BZ5胞内多糖的提取、纯化和性状鉴定 采用水提醇沉法从溶藻弧菌VZ5和芽孢杆菌BZ5的胞内产物中提取粗多糖,经乙醇、丙酮淋洗后冻干得到胞内多糖粗品。Sevag法除蛋白后测定多糖和蛋白质的含量。经过高压液相色谱进行纯化得到胞内多糖V0和B0。结果表明:弧菌多糖的多糖含量为65.79％,杆菌多糖的多糖含量为83.53%。V0和B0均具有DPPH自由基清除能力和还原能力,其中B0的DPPH自由基清除率和还原能力均高于V0。.