基于时间分辨荧光微球免疫层析试纸条对食品中两种抗生素残留的检测方法研究

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磺胺二甲基嘧啶(Sulfamethazine,SM2)和诺氟沙星(Norfloxacin,NOR)分别属于磺胺类药物和喹诺酮类药物,它们具有抑菌谱广、抑菌效果好、价格低廉等特点,广泛用于畜牧养殖业中细菌感染的治疗。这两种药物在养殖业中的不规范使用导致了它们在动物源食品中的残留,严重危害消费者的健康。因此,建立动物源食品中SM2和NOR残留的快速、简便、高通量的检测方法意义重大。本文基于时间分辨荧光微球和单克隆抗体,建立了猪肉、虾肉和鸡蛋三种动物源食品中SM2、NOR的层析试纸条方法,并开发了不使用任何有机溶剂的“环境友好型”样本前处理方法。具体结果如下:(1)通过微乳聚合法合成荧光微球,将其与SM2单克隆抗体偶联,经电子显微镜观察、粒径分析以及荧光强度测定,证明其偶联成功,并建立了猪肉、虾肉、鸡蛋中SM2单残留的免疫层析方法。其中该法对猪肉中SM2的检测限为0.87-5.16 μg kg-1,添加回收率为96%—103.8%;对虾肉中SM2的检测限为0.74-5.64 μg kg-1,添加回收率范围为90.47%—109.48%,对鸡蛋中SM2的检测限为0.11-0.89 μg kg-1,添加回收率范围为 96.00%—103.50%。(2)基于时间分辨荧光微球、SM2和NOR的单克隆抗体,分别建立了猪肉、虾肉、鸡蛋中同时检测SM2、NOR双残留的免疫层析方法。其中该法在猪肉中对NOR、SM2检测范围分别为:2.74-18.70 μg kg-1和0.49-3.02 μg kg-1,添加回收率范围为:94.1-114.4%和 93.0-115.5%;虾肉中对 NOR、SM2 的检测范围为 2.37-85.22 μg kg-1 和0.74-5.64μg kg-1,添加回收率范围为:85.7-111.3%和 83.8-112.5%;鸡蛋中 NOR、SM2的检测范围分别为4.68-16.54 μg kg-1和0.10-0.42 μg kg-1,添加回收率范围为90.21%-98.29%和 81.02%-95.21%。将建立的试纸条方法与高效液相色谱进行盲样检测对比,两种方法对猪肉盲样中SM2(y=1.0955x-0.1112,R2=0.9760)、NOR(y=0.9893x-0.1229,R2=0.9837)的检测结果均具有良好的线性关系,表明建立的基于时间分辨荧光微球的免疫层析试纸条方法可以应用于猪肉、虾肉和鸡蛋中SM2、NOR的高通量、快速、灵敏的定量检测,对动物源性食品中抗生素残留的检测具有深远的推广价值。
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