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目的乳腺癌是严重威胁妇女身心健康的恶性肿瘤之一,其发病率在国内呈逐年上升趋势,虽然近年来针对乳腺癌发病分子水平的研究比较深入,发现了多种因子及信号通路参与了乳腺癌的发生发展,但其发病机制仍然不清楚,针对乳腺癌相关分子的研究,仍是当前研究的重要课题。葡萄糖调节蛋白94(glucose regulated protein, GRP94),是主要贮存于内质网的分子伴侣,与HSP90有50%的同源性,参与内质网应激反应,同时也是未折叠蛋白反应下游关键分子,研究发现GRP94在结肠癌,胰腺癌,食管癌,乳腺癌等多种肿瘤中高表达,且参与了肿瘤的发生与发展,而其相关机制的研究是当前的热点之一。本课题在细胞水平检测了GRP94在乳腺癌细胞中的表达,同时在乳腺癌MCF7细胞中采用RNAi技术靶向下调GRP94表达,观察沉默GRP94对乳腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭迁移的影响并探讨其可能机制,有助于发现GRP94与乳腺癌发生发展之间的关系,为寻找新的乳腺癌治疗靶点、乳腺癌的预防与治疗提供理论依据。Wnt/β-catenin信号通路的众多成员都参与了乳腺癌的发生与发展过程,研究发现Wnt信号在乳腺癌中异常活跃,且协同TGFp信号通路参与调节肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭迁移等重要过程,本研究通过沉默GRP94表达,进一步探讨GRP94与Wnt/β-catenin信号通路之间的联系,进而阐释GRP94在乳腺癌发生发展过程中的重要作用。方法1. Real-time PCR、Western blot分别在mRNA与蛋白水平检测GRP94在乳腺上皮细胞MCF10A、乳腺癌MCF7、MDA-MB-231、BT474及SK-BR-3细胞株中的表达。2.采用RNAi靶向沉默技术,在乳腺癌MCF7细胞株中沉默GRP94基因表达,观察其对MCF7细胞增殖、凋亡及侵袭迁移的影响,并通过Western blot分别检测相关分子的表达。3.Western blot检测Wnt/p-catenin信号通路关键分子及相关靶基因的表达。结果1.GRP94在乳腺癌细胞中表达显著增高,且在MCF7细胞中表达最高(P<0.05)。2.在MCF7细胞中,沉默GRP94表达后,细胞周期阻滞在G1/S期,细胞增殖、克隆形成能力受到明显抑制,促进细胞凋亡的发生,细胞侵袭迁移能力减弱,MMP2、MMP9及VEGF表达降低、E-cadherin表达明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。3.沉默GRP94表达后,LRP6表达明显降低,APC和Axin表达增高,提示Wnt/β-catenin信号通路被阻断；细胞核及细胞浆中β-catenin表达明显减少,β-catenin核转位受到抑制,下游靶基因cyclin D1、c-myc表达减少。结论1.GRP94在乳腺癌细胞中表达显著增高,且MCF7中表达最高。2.下调GRP94表达后,抑制乳腺癌MCF7细胞增殖、侵袭迁移能力,促进细胞凋亡。3.下调GRP94表达可阻断Wnt/β-catenin信号通路,抑制β-catenin核转位调控下游靶基因的表达。