随着基因工程技术的发展，基因工程下游产物的纯化方法不断提高，目前纯化重组蛋白较为有效且普遍的方法是亲和层析技术。亲和层析技术的优势在于纯化蛋白高效，存在的不足是载体价格昂贵，机械强度低：由于蛋白酶的使用，致使纯化难度加大；配基制备困难，有的配基本身需要分离纯化；配基与载体偶联条件苛刻等，这些因素已限制了亲和层析技术规模化应用。新颖的内含肽介导PHB纯化蛋白体系，在蛋白纯化领域是一项重要的突破，它采用蛋白质自切割原件内含肽(intein)替代蛋白酶的作用，以细菌产生的内源性聚β-羟基丁酸酯(PHB)颗粒替代亲和基质的，将有效的简化纯化步骤，降低纯化蛋白的成本，是一种高效表达，自动切割，便于纯化，费用低廉蛋白纯化体系，有利于蛋白规模化纯化。该纯化方案的试验原理是：利用PHB结合蛋白phasin与PHB特异结合的特性，将phasin，内含肽和目的蛋白融合表达，融合蛋白phasin-内含肽-目的蛋白与PHB结合，由于PHB颗粒重力较大，通过简单离心即可携带融合蛋白与杂质分离，除去杂质后，改变PHB悬浮液的温度和PH值，促使内含肽C末端发生自动切割，释放目的蛋白至溶液，达到纯化目的蛋白的H标。国外研究报道利用该体系纯化了多种大分子蛋白，目前还未见国内开展有关方面的研究。本研究选用对原核细胞具有毒害作用的小肽——人源抗菌肽LL-37作为纯化对象，构建内含肽介导PHB纯化人源抗菌肽LL-37体系，纯化小分子量蛋白，补充该体系纯化小蛋白的研究，为进一步研究内含肽介导PHB纯化蛋白体系奠定基础。　　 本研究在已构建包含三个PHB颗粒结合蛋白phasin的串联基因和一个内含肽的基因的质粒pET_PPPI和合成PHB颗粒的质粒pJM9131的基础上，通过PCR技术，将互补引物连接成完整的LL-37目的片段，将该目的片段和pUCl9连接，构建克隆载体puCl9LL-37；将LL-37目的片断连接至pET_PPPI，进一步构建原核表达载体pET_PPPIL；将pET_PPPIL和pJM9131同时转入到大肠杆菌BL21(DE3)，构建内含肽介导PHB纯化人源抗菌肽LL-37体系：诱导重组菌BL21(DE3XpET_PPPIL+pJM9131)表达融合蛋白phasin-内含肽-LL-37，并利用该体系纯化目的蛋白LL-37。　　 研究结果表明，扩增获得的LL-37目的片段正确插入了原核表达载体pET_PPPI，并实现了在大肠杆菌中高效融合表达；目标蛋白LL-37通过本研究构建的内含肽介导PHB纯化人源抗菌肽LL-37体系纯化，纯化产物大小与预期相符，为进一步研究内含肽介导PHB纯化蛋白体系奠定了基础。