银鹊树SSR引物开发及遗传多样性研究

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:choasy
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银鹊树(Tapiseia sinensis Oliv.)系省沽油科(Staphyleaceae)瘿椒树属(Tapiscia Oliv.)落叶乔木,研究银鹊树对中国亚热带植物区系的划分和省沽油科的系统发育,有一定的科学价值,且银鹊树的叶片中富含黄酮类化合物,具有明显的抗渍疡、抗炎及降血脂等生物活性,在医药上应用广泛。此外,银鹊树的木材材质轻软,纹理直,刨面光滑,可作家具、板料等,实用价值大。同时其树形美观,树干挺拔,秋叶金黄,异常美观,又可作园林绿化树种。本研究对通过对珍稀濒危植物银鹊树进行野外调查和居群取样,采用磁珠富集法和双重抑制PCR扩增法对其进行特异的SSR引物开发,并利用筛选出多态性高的引物对其中两个居群的遗传多样性进行分析,具体研究结果如下:1、利用磁珠富集法筛选出420个阳性克隆,通过对其测序,成功合成了70对SSR引物,再进行PCR扩增筛选,最终有13对引物有条带扩增,其中5对具有多态性扩增,8对为单态性引物,多态性SSR引物得率为7.15%。利用双重抑制PCR扩增法筛选得到220个阳性克隆,测序后成功合成了41对SSR引物,通过PCR扩增筛选,最终有14对引物有条带扩增,其中6对具有多态性扩增,其余8对为单态引物,多态性引物得率为14.63%。2、利用对湖南舜皇山和江西武夷山两个居群66个样本对以上两种方法获得的11对具有多态性扩增的SSR引物进行居群检测,共扩增出60条等位基因条带,其中多态性条带为42条,多态性比率为70%,用GenALEx软件计算得出:等位基因数(NA)为2~9,平均等位基因数为3.818,观察杂合度(HO)为0.017~0.602,平均观察杂合度为0.317,期望杂合度(HE)为0.208~0.543,平均期望杂合度为0.378,且所有位点均不偏离哈迪—温伯格平衡,也没有发现各个居群中的位点有连锁不平衡的现象。因此本研究所得的11对引物为银鹊树物种特有的SSR引物3、遗传分析结果显示:湖南舜皇山居群等位基因数(NA)为1~3,平均值为1.909,有效等位基因(NE)为1~2.352,平均值为1.460,观察杂合度(HO)为0~621,平均值为0.160,期望杂合度(HE)为0~0.575,平均值为0.249,多样性指数(I)为0~0.927,平均值为0.390,表明湖南舜皇山居群内遗传多样性较低,遗传变异较小;江西武夷山银鹊树居群等位基因数(NA)为1~8,平均值为3.545,有效等位基因数(NE)为1~3.442,平均值为2.245,观察杂合度(HO)为0~0.750,平均值为0.475,期望杂合度(HE)为0~0.709,平均值为0.508,多样性指数(I)为0~1.455,平均值为0.864,表明江西武夷山居群内存在中等水平的遗传多样性。利用GenALEx软件分析湖南舜皇山和江西武夷山银鹊树居群的遗传结构,结果表明:居群内存在明显的遗传分化(FST=0.379)。居群间的基因流相对较低(Nm=0.521),居群间遗传分化也较明显。
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