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本实验建立与优化猪卵母细胞体外成熟、孤雌激活及冷冻保存体系,为实验室进一步研究打下基础。对猪卵母细胞体外成熟培养的研究,有助于揭示猪卵母细胞的成熟机理,为猪胚胎体外生产技术体系的建立提供依据。研究结果表明:1、建立了猪卵母细胞的体外成熟培养体系,最终成熟液配方为TCM-199(Earle’s)液+0.1%PVA+3.05mM D-glucose+0.91mM sodium pyruvae+75mg/mL penicillin+50mg/mL streptomycin+0.57mM cysteine+20IU/ml PMSG+20IU/ml hCG+30ng/ml EGF+10%pFF:2、通过研究发现,添加适当的pFF浓度可以提高猪卵母细胞的成熟率,本实验确定使用浓度为10%;3、比较了添加不同浓度EGF对猪卵母细胞体外成熟的影响,结果表明,添加EGF能显著提高猪卵母细胞的成熟率,且随着EGF添加量的增加卵母细胞的成熟率也在不断的提高,当EGF添加量达到50ng/ml时,卵母细胞的成熟率达到78.1%;4、研究了卵巢运输时间及保存温度对卵母细胞成熟率的影响,结果表明,4h以内,温度控制在35℃左右对猪卵母细胞的体外成熟较好,卵母细胞的成熟率可达75%以上;5、通过实验比较,发现从处于卵泡期的卵巢所采集的卵母细胞在成熟率上与处于黄体期的卵巢并无显著差异;6、比较不同成熟时间对猪卵母细胞体外成熟的影响,结果发现,成熟率随时间的增加而增加,48h成熟率可达到78.6%,但48h试验组孤雌激活后在卵裂率上却有明显下降;7、通过实验研究,确定了猪卵母细胞的孤雌激活体系为Ionomycin+6-DAMP+CB,卵母细胞在6-DAMP中作用的最佳时间为4h;8、通过试验比较,玻璃化冷冻对猪卵母细胞进行冷冻保存更为有效,冷冻保护剂选择EG或者EG+DMSO混合组;9、通过实验比较,GV期的卵母细胞冷冻效果要明显高于MⅡ期的卵母细胞,两者之间差异显著:10、通过试验比较,确定了冷冻步骤采用6步法冷冻,解冻步骤采用4步法解冻。