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目的:Sel1L(Suppressor/Enhancer of Lin-12-like)是内质网上的羟甲基戊二酰基还原酶降解蛋白1(Hrd1)的衔接蛋白,其构成的Sel1L-Hrd1复合物可以通过对免疫细胞的蛋白质合成的调控,从而调节免疫细胞的功能。有研究表明,Sel1L参与自身免疫性疾病及多种癌症类型的肿瘤的发生、发展,而树突状细胞在激发免疫应答以及免疫耐受方面起重要作用。本文构建Sel1Lf/fCD11c-Cre+/-基因敲除小鼠模型,研究Se1l L对骨髓源树突状细胞功能的影响。方法:1.采用Cre-Loxp重组酶系统构建DCs细胞特定基因敲除小鼠模型。将Sel1Lf/f小鼠与CD11c-Cre+/-小鼠(C57BL/6背景)进行杂合,其子代小鼠的基因型经PCR鉴定后,筛选出Sel1Lf/f CD11c-Cre+/-小鼠。2.取适龄的野生型(WT)小鼠及敲除型(KO)小鼠,分别称取两组小鼠的体重以及脾脏的重量,并进行拍照。3.脾脏组织切片用HE染色进行观察。采用流式分析小鼠脾脏中CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、B220+B细胞、CD11c+细胞及c DCs亚群比例变化。流式检测CD11c+细胞表面共刺激分子及抗原提呈分子的表达情况。4.用GM-CSF、IL-4诱导培养BMDCs,LPS刺激成熟后,收集细胞及上清。Western blot检测BMDCs中Sel1L的表达情况。流式检测CD11c+DCs群体数及CFSE的变化。流式分析BMDCs表面CD80、CD86、MHC-I及MHC-II的表达情况。ELISA和q RT-PCR检测炎症相关分子IL-6和IL-12的表达水平。流式检测DCs诱导抗原特异性CD4+T细胞及CD8+T细胞增殖的能力。结果:(1)与野生型小鼠相比,敲除型小鼠的脾脏重量明显增大,肉眼观察其发生明显充血肿胀变大,组织切片显示脾脏的白髓区相对明显变小。(2)流式结果表明Sel1L的缺失使脾脏的CD8+T细胞数量降低。敲除型小鼠的脾脏中CD11c+细胞数量升高,c DCs亚群中c DC1s数量明显降低而c DC2s数量升高,同时BMDCs细胞在诱导分化过程中的增殖效率受到抑制。(3)敲除型小鼠DCs分泌炎症因子的能力及MHC-I的表达升高,增强对CD8+T细胞的激活,同时MHC-II的表达显著降低,抑制CD4+T细胞的增殖。结论:在DCs中特异性敲除Sel1L,降低BMDCs分化效率,促进炎性因子分泌,并调控其抗原提呈功能,在激发免疫应答中发挥重要作用。