输卵管积水影响体外受精—胚胎移植结局的机制研究

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目的:探讨两种手术方式切除积水输卵管对体外受精胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer, IVF-ET)的影响。方法:选择输卵管因素不孕患者653例,分3组,其中125例病人因输卵管积水在我院行抽芯法输卵管切除,术前月经第3天及术后第3个月经周期第3天取空腹晨血,放射免疫法测定基础促卵泡生成素(FSH)、雌二醇(E2),阴道超声检测双侧卵巢体积和卵巢内窦卵泡数目,再实施标准长降调方案IVF-ET;104例因异位妊娠或输卵管积水,在本院或外院行传统输卵管切除法。月经周期第3天取空腹晨血,放射免疫法测定基础促卵泡生成素(FSH)、雌二醇(E2),阴道超声检测双侧卵巢体积和卵巢内窦卵泡数目,再实施标准长降调方案IVF-ET;424例因慢性输卵管炎或盆腔粘连,未行输卵管切除,并排除男方不孕因素而实施IVF-ET治疗。月经周期第3天取空腹晨血,放射免疫法测定基础促卵泡生成素(FSH)、雌二醇(E2),阴道超声检测双侧卵巢体积和卵巢内窦卵泡数目。结果:1、手术后情况:125例行腹腔镜下输卵管抽芯切除术患者术后伤口均甲级愈合,无发热、腹腔内出血渗血、阴道排液等,复查阴道超声附件区未见异常回声,术后5-7d患者出院,术后2个月进入IVF治疗周期。2、手术后经过比较三组病人之间卵巢储备功能,发现抽芯组与未手术组窦卵泡数差异无统计学意义(P=0.094),而传统手术组窦卵泡数少于抽芯组和未手术组(均P〈0.05)。三组卵巢体积、基础内分泌FSH、LH分别比较,差异均无统计学意义(均P〉O.05)3、行IVF-ET治疗过程及治疗后各种指标及结局:(1)内分泌激素水平比较:月经周期第3天三组FSH、E:差异均无统计学意义(P>0.05)。HCG注射日传统手术组E2低于抽芯法组和未手术组(均P〈0.05),抽芯法组与未手术组比较差异无统计学意义(P=0.659)。(2)取卵数及Gn用量比较:抽芯法组与未手术组取卵数、Gn用量差异均无统计学意义(P=0.982,0.974)。传统手术组取卵数少于抽芯法组和未手术组(均P<0.05),使用Gn用量多于与抽芯法组和未手术组(均P<0.05)。(3)临床妊娠率比较:抽芯法组妊娠率为61.2%,传统手术组为58.6%,未手术对照为56.2%,三者比较差异无统计学意义。结论:1.输卵管积水会影响到IVF-ET的妊娠结局,助孕治疗前进行合理的预处理会提高IVF-ET的助孕效果。2.相对于传统的输卵管切除术,腹腔镜下抽芯法输卵管切除术预处理拟实施IVF-ET的输卵管积水患者,不影响卵巢储备和卵巢刺激反应性,且能提高临床妊娠率,机制可能在于IVF-ET过程多个环节的改善,但其对卵巢功能的远期影响还需多中心、大样本的前瞻性研究。目的:探讨不同颜色积水输卵管液体的生化组分、细胞因子和微生物检测的差别及其对人类早期胚胎发育的影响。方法:选择因输卵管积水进行腹腔镜手术治疗的患者33例,其中有色积液(输卵管积液呈现为深浅不等的棕色或者红色)者16例,无色积液(积水输卵管液体为无色透明)者17例。腹腔镜下确认积水输卵管后,以无菌穿刺针选择管壁较薄的部位刺入输卵管管壁内,负压抽吸输卵管积液后分为3部分,1部分立即送检进行常规细菌培养及衣原体抗原检查,第2部分进行各种电解质浓度及蛋白质浓度、葡萄糖浓度等生化检测,第3部分以酶联免疫吸附实验(ELISA)方法行肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、白介素-2(IL-2)检测以及将人类3原核(3PN)胚胎放置于不同浓度的输卵管积液进行囊胚培养观察其发育情况。结果:1、两组输卵管积液中,无色积液中葡萄糖含量高于有色积液,其它化学组成及pH值、渗透压等物理特性没有差异(P>0.05),但两组输卵管积液与囊胚培养液相比,pH值、碳酸氢根离子明显升高(P<0.05和P<0.01),钾离子、钙离子、镁离子、葡萄糖显著降低(P<0.01,P〈0.05,P<0.01,P<0.01),输卵管积液中未检测到磷酸盐,但在囊胚培养液中检测到磷酸盐值为0.26±0.03mmol/L,两组输卵管积液中pH值均明显升高(P<0.05)2、对两组输卵管积液进行ELISA检测TNF-a和IL-2的浓度,发现有色积液中两种细胞因子的水平明显升高,具有统计学意义(均P<0.05)。3、对两组输卵管积液均进行常规细菌培养和衣原体抗原检测结果:发现有色积液中衣原体抗原阳性率为62.5%,无色液体中衣原体抗原阳性率为70.6%,两组比较没有显著性差异;所有输卵管积液进行常规细菌培养后均没有发现细菌生长。4、3PN胚胎的囊胚培养结果将不同浓度的输卵管积液进行3PN胚胎囊胚培养后观察不同颜色输卵管积液中的囊胚形成情况,发现有色输卵管积液及无色输卵管积液对3PN胚胎的囊胚形成率、囊胚孵出率及优质囊胚形成率均无显著性差异((P>0.05)。汇总所有不同浓度的输卵管积液对3PN胚胎的囊胚培养结果,发现在低浓度输卵管积液(输卵管积液浓度50%以下)中,囊胚形成率、囊胚孵出率及优质囊胚率不受影响,但在高浓度的输卵管积液中(输卵管积液浓度75%),囊胚形成率、囊胚孵出率及优质囊胚率却受到显著影响,具有统计学意义(P<0.05)。结论:1、输卵管积水与衣原体感染有关,但对输卵管积水患者是否应用抗衣原体感染的药物来改善IVF-ET结局值得探讨。2、低浓度的输卵管积液对胚胎的发育无不良影响,但高浓度的输卵管积液影响明显,这种影响可能与高浓度的积液缺乏胚胎发育所需的必要元素有关。3、不同颜色输卵管积液TNF-a和IL-2含量不同,但输卵管积液中异常的TNF-a和IL-2浓度似乎对胚胎发育没有不良影响。目的:探讨不同颜色积水输卵管液体对子宫内膜的影响。方法:1、输卵管积水组:选择161例因输卵管积水行腹腔镜手术治疗的病人,术中同时行宫腔镜检查观察子宫内膜形态。根据腹腔镜手术中所见输卵管积液的颜色,161例输卵管积水病人中有19例为有色积液,142例为无色积液。对其中19例有色积液的病人和20例无色积液病人行子宫内膜活检备行显微形态学观察及炎性细胞因子TNF-a和IL-2检测。2、非输卵管积水组:110例因慢性输卵管炎或盆腔粘连,无输卵管积水证据,并排除男方不孕因素而拟实施IVF-ET治疗,治疗前行宫腔镜检查。其中30例病人行子宫内膜活检备行显微形态学观察及炎性细胞因子TNF-a和IL-2检测。结果:1、对19例有色输卵管积水、142例无色输卵管积水及110例非输卵管积水病人进行了宫腔镜检查,总结了3组病人中宫腔镜下子宫内膜炎性表现的发生率分别为63.2%(12/19)、22.5%(32/142)和20.9(23/110),有色输卵管积水病人宫腔镜下子宫内膜的炎性表现发生率明显高于非输卵管积水病人和无色积水组。2、对所有19例有色积水的病人和无色积水组中的20例病人以及非积水组中的30例病人行子宫内膜活检后按照宫腔镜下炎性表现和正常表现分组,炎性表现组21例,正常表现组48例进行苏木素-伊红染色、免疫组化及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测炎性细胞因子TNF-a和IL-2在子宫内膜组织的表达。TNF-a免疫组化半定量分析提示:在有炎性表现的子宫内膜组织腺上皮细胞的细胞膜和细胞浆中,TNF-a表达明显高于没有炎性表现的子宫内膜组织(P<0.01);间质细胞均表达较弱,无统计学意义。在有炎性表现的子宫内膜组织腺上皮细胞的细胞膜和细胞浆中,IL-2表达明显高于没有炎性表现的子宫内膜组织(P<0.01);间质细胞均表达较弱,无统计学意义。RT-PCR检测子宫内膜TNF-a和IL-2结果表明,有炎性表现的子宫内膜组织表达TNF-a mRNA的水平高于没有炎性表现的子宫内膜,分别为75.25±11.95和23.05±9.72,两者比较有显著性差异(p<0.01)。有炎性表现的子宫内膜组织表达IL-2mRNA的水平高于没有炎性表现的子宫内膜,分别为79.56±13.36和33.12±8.32,两者比较有显著性差异(p<0.01)。结论:1、子宫内膜炎与输卵管积水有关,输卵管积水诱发的子宫内膜炎性反应因人而异,有色输卵管积液病人更容易发生子宫内膜炎,可能因此而影响子宫内膜容受性。2、无色输卵管积液与慢性子宫内膜炎无明显相关性,其是否影响子宫内膜容受性及具体机制尚需要进一步研究,其对IVF-ET妊娠结局的影响可能在于在宫腔内对胚胎的机械性“冲刷”作用。
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