小曲中优良根霉的分离筛选及产酶条件研究

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我国小曲资源丰富,构成了一个巨大的微生物菌种库,里面蕴藏着许多质量优良的菌种。本文以收集的传统小曲为样本,分离并纯化其中的根霉,筛选得到了ERh203和ERh505两个优良菌株,同时研究了其产酶特点,优化了制曲条件,并完成了对菌株的鉴定工作。实验结果如下:(1)通过对8种传统小曲样品的分析发现:曲2糖化力和液化力最高,蛋白酶活力也较高,而曲5具有最高的蛋白酶活力,糖化力和液化力也相对较高,从这两种小曲中分离纯化并得到了12株根霉。通过制曲和糯米试饭试验,比较了各菌株的产酶特点,筛选出了ERh203和ERh505两株优势根霉。同时发现,这两株根霉都具有一定的产酒精能力,这也是优良根霉的重要特点之一。(2)单因素试验表明,培养时间对两株根霉产酶有较大的影响,培养3—4天有利于根霉的生长和酶活力的提高。同时,温度也影响着根霉的产酶情况,在30℃时,糖化酶和液化酶活力较高,而蛋白酶活力则在26℃下培养时却达到最大值。在pH5.2—pH7.0之间,根霉产酶活性比较稳定。在麸皮培养基中添加一定量的玉米粉能显著提高根霉的产酶能力,当玉米粉浓度为8%—12%时,酶活力都有不同程度的增加。ERh203在玉米粉浓度为8%时,糖化酶活力和液化酶活力都达到最大,分别为919.37 mg/h·g-1和648.64 mg/h·g-1,分别增加了6.7%和5.4%,蛋白酶活力在添加12%玉米粉时达到最大值860.74μg/min·g-1,增加了5.9%。(3)正交试验结果表明:培养温度、培养时间、玉米粉浓度对菌株ERh203产糖化酶、液化酶和蛋白酶的活性的影响显著。对糖化酶的影响顺序是培养温度>培养时间>玉米粉浓度,最佳条件是培养温度30℃、培养时间3d和添加玉米粉浓度8%。对液化酶的影响是培养时间>培养温度>玉米粉浓度,最佳条件是温度30℃、时间3d和玉米粉浓度8%。对蛋白酶的影响是培养时间>培养温度>玉米粉浓度,最佳条件是培养温度28℃、培养时间4d和玉米粉浓度12%。(4)通过显微镜下菌落形态,如菌丝、假根、孢子囊、孢囊孢子、厚垣孢子等的观察和测量,结果为:ERh203是藻状菌纲(Phycomycetes)毛霉目(Mucorales)毛霉科(Mucoraceae)根霉属(Rhizopus Ehrenberg)中的米根霉(Rhizopus oryzae Went et Prinsen Geerlings),ERh505是藻状菌纲(Phycomycetes)毛霉目(Mucorales)毛霉科(Mucoraceae)根霉属(Rhizopus Ehrenberg)中的河内根霉(Rhizopus tonkinensis Vuill)。
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