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口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤。吸烟、饮酒等不良生活习惯可影响OSCC的发生发展,严重威胁着人类的健康。
OSCC发生发展是多阶段的过程,有多个基因及转录因子参与调控:涉及一系列生理病理反应,包括肿瘤细胞的增殖、粘附、侵袭、血管生成等。癌基因Ets(E26transformation-SpeeifiC,EtS)家族在肿瘤发生发展中起着重要作用,尤其是能够调控肿瘤的转移。
随着肿瘤分子生物学的发展,对Ets-2(E26 transformation-specific-2,Ets-2)的研究逐渐增多。Ets-2作为细胞转录调控因子在多个生理、病理过程中发挥重要作用,如胚胎发育、组织成熟等。它的高表达可能通过凋亡、血管生成、免疫监视等多种途径来参与肿瘤的发生发展。MMP-9是降解细胞外基质骨架蛋白Ⅳ型胶原主要酶类之一。研究发现MMP-9与肿瘤的侵袭和转移以及肿瘤组织中的血管生成关系密切。肿瘤分子生物学研究表明,MMP-9可以降解口腔黏膜上皮的细胞外基质(Extracellular Matrix,ECM)和基底膜(Basement Membrane,BM),从而破坏其参与构成的生物屏障,促使肿瘤细胞的扩散,可以准确地反映癌细胞的侵袭和转移特性。血管内皮生长因子(Vascular Endothelial GrowthFactor,VEGF)是一种血管生长因子,作用力较强特异性高。它在肿瘤的血管生成、局部转移中发挥重要的作用。目前,Ets-2也在OSCC组织中的表达及其与肿瘤侵袭、转移的关系研究较少。
目的:
研究Ets-2、MMP-9、VEGF蛋白在口腔正常黏膜(Normal Oral Mucosa,NOM)、上皮异常增生(Dysplastic Oral Mucosa,DOM)及OSCC中的表达状况,分析三者之间的相关性以及与OSCC临床病理分级关系,探讨它们在OSCC发生发展过程中的作用及意义,为OSCC的临床诊断、治疗、预后以及生物学评估提供新的思路和理论依据。
材料和方法：
选择68例口腔鳞癌(OSCC)组织、19例口腔黏膜上皮异常增生(DOM)组织和15例正常口腔黏膜(NOM)组织,应用PV-9000两步免疫组织化学染色法检测Ets-2、MMP-9和VEGF蛋白的表达情况,分析其在口腔黏膜癌变过程中的变化趋势及在各组间表达的差异。所有组织标本均在手术切除后1h内收集,经4％多聚甲醛磷酸缓冲液(PH7.4)固定,石蜡包埋,术前均未接受放疗、化疗及其他治疗。根据数据类型分别采用秩和检验(Wilcoxon两样本比较法),x2检验,多组间总体比较采用.Kruskal-Waillis检验,相关性分析采用Spearman等级相关分析。取α=0.05为显著性检验水准。所有实验数据采用SPSS13.0软件进行统计学分析。
结果：
1.Ets-2在15例NOM中仅有1例呈弱阳性表达,在19例DOM中7例呈弱阳性表达,在NOM和DOM组中均无强阳性表达,在68例OSCC组织中54例呈弱阳性表达,9例呈强阳性表达,三组总体及组间比较均有显著性差异(P<0.001)；OSCC按分化程度分组,Ets-2在29例高分化组中表达阳性24例,25例中分化组中阳性表达25例,14例低分化组中阳性表达14例。三组间总体比较Ets-2表达阳性与鳞癌的病理分级的关系有显著性差异(P<0.05)。高分化组与中分化组及低分化组比较有显著性差异(P<0.05),中分化与低分化组比较无显著性差异(P=0.534)。在OSCC患者按年龄、性别、瘤体大小等分组间比较Ets-2的表达无显著性差异(P>0.05)；在按有无淋巴结转移、临床分期等分组间比较Ets-2的表达差异有显著性差异(P<0.05)。
2.MMP-9在15例正常黏膜中阳性表达1例,在19例上皮异常增生口腔黏膜中阳性表达7例,两组均无强阳性表达,68例鳞癌中阳性表达68例,其中强阳性表达23例。三组总体差异及组间差异均有统计学意义(P<0.05)。MMP-9在口腔鳞癌中均为阳性表达,在高分化组中强表达阳性3例,强阳性率为10.34％,中分化组中强阳性表达12例,强阳性率48.00％,低分化组中强阳性表达8例,强阳性率为57.14％。三组间总体比较有显著性差异(P<0.05)；高分化组与中分化组及低分化组比较MMP-9表达阳性率有显著性差异(P<0.05.)；中分化组与低分化组比较MMP-9表达阳性率无显著性差异(P=0.589)。在OSCC患者按年龄、性别、瘤体大小等分组间比较MMP-9表达无显著性差异(P>0.05)；在按有无淋巴结转移、临床分期等分组间比较MMP-9的表达差异有显著性差异(P<0.05)。
3 VEGF在15例正常黏膜中阳性表达1例,阳性率为6.67％,在19例上皮异常增生口腔黏膜中阳性表达5例,阳性率为26.32％。68例鳞癌中阳性表达50例,阳性率为75.53％。三组总体差异及组间差异均有统计学意义(P<0.05)。VEGF在高分化组、中分化组、低分化组三组间总体比较无显著性差异(P>0.05)。在OSCC患者按年龄、性别、瘤体大小等分组间比较VEGF表达无显著性差异(P>0.05)；在按有无淋巴结转移、临床分期等分组间比较VEGF的表达差异有显著性差异(P<0.05)。
4.Spearman等级相关分析表明,在OSCC中,Ets-2与MMP-9的表达存在正相关关系(r=0.153,P<0.05),Ets-2与VEGF的表达无相关关系(r=0.127,P=0.303)。
结论：
1.在口腔黏膜上皮恶变过程中存在Ets-2相关机制的异常。在OSCC中,Ets-2、MMP-9及VEGF的表达与临床分期、有淋巴结转移有关,提示三者与OSCC的侵袭及转移紧密相关。Ets-2、MMP-9的表达与肿瘤的分化程度有关,提示二者的表达与OSCC的恶性程度有关。
2.Ets-2与MMP-9在OSCC中的表达呈正相关,提示二者在OSCC的发展过程中有协同作用。Ets-2可能通过调控MMP-9的表达参与OSCC的发生发展。
3.通过联合检测Ets-2、MMP-9、VEGF在OSCC中的表达有利于指导临床制定治疗方案。