论文部分内容阅读
核酸适配体因具有高度特异性和专一性以及稳定性好、易于化学修饰、目标配体范围广等优点,广泛应用于环境检测及食品安全分析。本文通过“sol-gel”法制备巯基有机-无机硅胶杂化整体柱,以纳米金为连接媒介,制备了具有超高适配体覆盖密度的有机-无机硅胶杂化亲和色谱柱,实现了对赭曲霉毒素A的高灵敏度识别与检测。主要内容如下:第一章,文献综述。概述了毛细管整体柱的类型和研究进展,介绍纳米金整体柱的研究进展与应用,重点对核酸适配体的特点以及核酸适配体亲和整体柱的研究进展与应用进行的概述,并且对本论文的研究内容及意义进行介绍。第二章,以四甲氧基硅烷(TMOS)和巯丙基三甲氧基硅烷(MPTMS)作为硅烷化试剂,制备了poly(TMOS-co-MPTMS)杂化硅胶毛细管整体柱;制备了不同尺寸大小的纳米金,通过柱后衍生纳米金和巯基核酸适配体,制备了Apt@AuNPs@poly(TMOS-co-MPTMS)杂化亲和整体柱。实验考察了所制备的杂化整体柱的组成、形貌结构、能谱分析以及红外光谱和机械稳定性表征。表征了核酸适配体在杂化整体柱上的修饰量,系统考察了基质柱渗透性及纳米金粒径尺寸对Apt@AuNPs@ poly(TMOS-co-MPTMS)杂化亲和柱纳米金修饰量及对目标物OTA富集、洗脱效果的影响。所制备的Apt@AuNPs@poly(TMOS-co-MPTMS)新型杂化亲和整体柱具有高适配体覆盖密度,可达3,494pmol/uL、稳定性强。第三章,基于AuNPs@poly(TMOS-co-MPTMS)柱,开展了核酸适配体杂化亲和整体柱对目标物OTA亲和性能研究。应用核酸适配体对OTA的特异选择性及高亲和作用力,考察了Apt@AuNPs@poly(TMOS-co-MPTMS)柱对OTA的识别作用;考察了所制备的亲和柱对目标物OTA的回收率,并优化了洗脱参数;考察了目标物OTA在亲和柱上的负载量以及亲和整体柱对目标物OTA的检测限,应用于啤酒等酒类样品中OTA的分析、检测以及杂化亲和整体柱的使用寿命测试。结果表明,所制备的Apt@Au@poly(TMOS-co-MPTMS)杂化亲和整体柱对OTA具有高特异识别能力,稳定性较好,使用寿命大于3个月,对标准溶液中的OTA回收率可达92.3±2.1%和92.5±0.5%(n=3),OTA负载量为9.75ng,未经大体积进样富集时检测限达到0.025 ng/mL。在加标酒样中杂化亲和整体柱对目标物OTA具有较高特异识别能力,在0.5-5 ng/mL的OTA加标浓度范围,啤酒样品中OTA的平均回收率在89.6±3.7%-91.8±1.6%之间;葡萄酒样品中OTA平均回收率在90.3±2.8-91.6±2.7%之间,回收率高。