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为了探讨E.tenella宿主细胞钙稳态在线粒体凋亡途径中的作用与机理,采用原代鸡胚盲肠上皮细胞培养技术、酶联免疫分析技术、分光光度计技术、HE染色技术、流式细胞技术和荧光定量PCR技术等,对细胞内钙离子螯合剂（BAPTA/AM）.胞外钙离子螯合剂（EGTA）、内质网上三磷酸肌醇受体（IP3R）和兰诺定受体（RyR）通道阻断剂（肝素钠和Ryanodine）、钙蛋白酶抑制剂（SJA6017）和钙调蛋白抑制剂（三氟拉嗪）处理和非处理的E.tenella宿主细胞凋亡率、虫体感染率、线粒体通透性转运孔（MPTP）开放情况、钙离子浓度、胞浆内细胞色素C （Cytc）含量、Ca2+-ATP酶活性、细胞内钙蛋白酶含量、细胞内Bax和Bid mRNA及蛋白表达量、细胞内钙调神经磷酸酶含量及细胞内Bad和14-3-3蛋白表达量的动态变化进行了测定,结果表明：（1）接种E.tenella子孢子后4-120h,子孢子接种不加药组（TO）宿主细胞内的钙离子荧光强度极显著（P<0.01）或显著（P<0.05）高于空白对照组（C）,表明E.tenella感染宿主细胞会引起宿主细胞内钙离子浓度升高。（2）接种E.tenella子孢子后,除4h和120h,胞内钙离子螯合剂（BAPTA/AM）组（T3组）的宿主细胞内游离钙离子浓度极显著（P<0.01）或显著（P<0.05）低于TO组；在接种后4h,T3组宿主细胞凋亡率显著（P<0.05）高于TO组,而在接种后24-120h,T3组宿主细胞早期凋亡率在48h、96h和120h显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）低于T0组,T3组宿主细胞晚期凋亡率和坏死率极显著（P<0.01）低于TO组；在接种子孢子后4-120h,T3组宿主细胞内Calcein-AM+的平均荧光强度都高于TO组,而在96h和120h,T3组细胞内Calcein-AM+的平均荧光强度显著（P<0.01或P<0.05）高于TO组；接种子孢子后4h,T3组细胞胞浆内Cytc的含量显著高于T0组（P<0.05）,而接种子孢子后24-120h,T3组细胞胞浆内Cytc的含量低于TO组,其中24h、96h和120h细胞胞浆内Cytc的含量显著（P<0.01或P<0.05）低于TO组。由此可得出, E.tenella宿主细胞内游离钙离子浓度变化可以调节MPTP开放程度和胞浆内Cytc的含量,从而调控宿主细胞的凋亡。（3）接种E.tenella子孢子后4-120h,胞外钙离子螯合剂（EGTA）组（T2组）和内质网上的IP3R和RyR钙离子通道阻断剂（肝素钠和Ryanodine）子孢子接种组（T1组）细胞内Ca2+的平均荧光强度都低于TO组,在48h、96h、120h,T2组细胞内Ca2+的平均荧光强度极显著（P<0.01）或显著（P<0.05）低于TO组；在48-96h,T1组细胞内Ca2+的平均荧光强度极显著（P<0.01）低于T0组。表明,细胞外钙离子浓度的变化和内质网上的钙离子通道对E.tenella宿主细胞内游离Ca2+浓度起着非常重要的调控作用。（4）接种E.tenella子孢子后4h,T1和T2组宿主细胞凋亡率、胞浆内Cytc都高于TO组,而接种后24-120h,T1和T2组宿主细胞凋亡率、胞浆内Cytc都低于TO组；接种子孢子后4-120h,T1和T2组宿主细胞内Calcein-AM+的平均荧光强度都高于TO组；在接种子孢子后4h,T1和T2组Ca2+-ATP酶活性低于TO组,而在接种子孢子后24-120h,T2组Ca2+-ATP酶活性高于TO组。表明降低胞外游离钙离子浓度和阻断内质网上的钙离子通道可以使E.tenella宿主细胞降低MPTP开放和Cytc释放,提高Ca2+-ATP酶活性。（5）接种E.tenella子孢子后4h,子孢子接种不加药组（TO组）宿主细胞内钙蛋白酶含量极显著（P<0.01）低于C组,而在接种后24-120h,TO组细胞内钙蛋白酶的含量都极显著（P<0.01）高于C组；在接种4h后,细胞内钙离子螯合剂（BAPTA/AM）组（T3组）宿主细胞内钙蛋白酶的含量极显著高于（P<0.01）TO组,在接种后24h、72h、96h和120h T3组宿主细胞内钙蛋白酶的含量极显著（P<0.01）或显著（P<0.05）低于TO组。表明,E.tenella感染早期会引起宿主细胞内钙蛋白酶含量降低,而中后期升高,并且降低细胞内Ca2+浓度会导致钙蛋白酶的含量减少。（6）接种E.tenella子孢子后4h、48h、96h和120h,钙蛋白酶抑制剂（SJA6017）组（T4组）宿主细胞内Calcein-AM+的平均荧光强度显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）高于TO组；在接种后4h,T4组宿主细胞的早期凋亡率及晚期凋亡率和坏死率都高于TO组,其中晚期凋亡率和坏死率极显著（P<0.01）高于TO组,在接种后24-120h,T4组宿主细胞的早期凋亡率低于TO组,其中在48h、96h和120h T4组宿主细胞的早期凋亡率显著（P<0.01或P<0.05）低于T0组,在接种后24-120h,T4组宿主细胞的晚期凋亡率和坏死率极显著（P<0.01）或显著（P<0.05）低于T0组,表明细胞内钙蛋白酶可以通过调节MPTP的通透性调控E.tenella诱导的宿主细胞凋亡。（7）接种E.tenella子孢子后4h,TO组宿主细胞内Bax、Bid mRNA和蛋白表达量均显著（P<0.01或P<0.05）低于C组,T4组Bax、Bid mRNA和蛋白表达量均高于TO组,其中T4组Bax mRNA表达量显著（P<0.05）高于T0组；而接种24-120h,TO组宿主细胞内Bax、Bid mRNA和蛋白表达量均显著（P<0.05）高于C组,除120h时外,Bax含量均显著（P<0.01或P<0.05）高于C组,T4组Bax、Bid mRNA和蛋白表达量低于TO组,其中T4组Bax mRNA表达量在24-72h极显著（P<0.01）低于T0组,Bid mRNA表达量在24h-120显著（P<0.01或P<0.05）低于TO组,Bax蛋白表达量在48h显著（P<0.05）低于TO组,Bid蛋白含量在48h、72h和120h显著（P<0.01或P<0.05）低于TO组。表明感染E.tenella的宿主细胞Bax、Bid基因表达上调,钙蛋白酶可以通过调节Bax、Bid的表达调控E.tenella诱导的宿主细胞线粒体凋亡通路。（8）接种E.tenella子孢子后4h,子孢子接种不加药组（TO）宿主细胞内钙调神经磷酸酶含量低于C组（P>0.05）,而在接种后24-120h,除96h外,其余时间TO组细胞内钙调神经磷酸酶的含量都极显著（P<0.01）或显著（P<0.05）高于C组；在接种后4h,细胞内钙离子螯合剂（BAPTA/AM）组（T3组）细胞内钙调神经磷酸酶的含量高于TO组（P>0.05）,而在接种子孢子后24h、48h和120h,T3组细胞内钙调神经磷酸酶的含量极显著（P<0.01）或显著（P<0.05）低于T0组。表明E.tenella感染宿主细胞早期会引起宿主细胞内钙调神经磷酸酶含量降低,而中后期升高,并且钙调神经磷酸酶的变化受到细胞内Ca2+的调节。（9）在接种E.tenella子孢子后4h-120h,钙调蛋白抑制剂（三氟拉嗪）组（T5组）细胞内的Calcein-AM+的平均荧光强度都高于TO组,其中120h T5组细胞内的Calcein-AM+的平均荧光强度显著（P<0.05）高于T0组；在接种后4h,T5组细胞的早期凋亡率及晚期凋亡率和坏死率极显著（P<0.01）或显著（P<0.05）高于TO组,而在接种子孢子后24-120h,T5组细胞的早期凋亡率均极显著（P<0.01）或显著（P<0.05）低于TO组,T5组宿主细胞晚期凋亡和坏死率在接种后48h-120h极显著（P<0.01）低于TO组,表明钙调蛋白通过调节钙调神经磷酸酶和MPTP的通透性调控E.tenella的宿主细胞凋亡。（10）接种E.tenella子孢子后4h,TO组宿主细胞内Bad、14-3-3蛋白含量显著（P<0.05）低于C组,T5组Bad、14-3-3蛋白含量高于TO组（P>0.05）；而接种子孢子后24-120h,TO宿主细胞内组Bad、14-3-3蛋白含量高于C组,其中48-120h,Bad的含量显著（P<0.05）高于C组,在24h、72h、96h和120h,14-3-3蛋白的含量显著（P<0.05）高于C组,T5组宿主细胞内Bad、14-3-3蛋白含量低于TO组,其中在72h,Bad蛋白含量显著（P<0.05）低于TO组。表明E.tenella宿主细胞Bad、14-3-3蛋白表达上调,钙调蛋白可以通过调节Bad、14-3-3的蛋白表达调控E.tenella宿主细胞线粒体凋亡通路。