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目的:探讨CTP-FoxM1抗原负载DCs疫苗对C57BL/6小鼠肝癌Hepa1-6细胞皮下瘤模型的免疫预防效应,为临床应用DC疫苗防治肝癌奠定了理论基础。方法:(1)根据GenBank选出C57BL/6小鼠FoxM1的关键抗原表位序列串连为4聚体与CTP连接,将已连接好的CTP-FoxM1重组基因插入到pCold-TF载体上,进而构成pCold-TF-CTP-FoxM1质粒,并通过大肠杆菌BL21工程菌表达该蛋白,且通过镍离子亲和层析柱(Ni2+-NTA)进行纯化,得到目的蛋白后经超滤浓缩杯浓缩,Western blot鉴定目的蛋白。细胞免疫荧光和激光共聚焦观察融合蛋白CTP-Fox M1在DCs中的亚细胞定位情况。(2)CTP-FoxM1、CTP、FoxM1蛋白以及对照组PBS分别作用DCs48 h后,CCK-8试剂盒检测抗原负载DCs疫苗刺激同种异体淋巴细胞增殖能力,LDH试剂盒检测抗原负载DCs疫苗体外杀伤Hepa1-6肝癌细胞株的CTL应答效应。(3)CTP-FoxM1、CTP、FoxM1抗原负载的DCs疫苗免疫C57BL/6小鼠3次后皮下注射Hepa1-6肝癌细胞株,观察抗原负载DCs疫苗对c57bl/6小鼠肝癌的免疫预防效应。结果:(1)成功构建了pcold-tf-ctp-foxm1重组质粒;在37℃、1mmiptg诱导3h的条件下,获取了高效、可溶性ctp-foxm1融合蛋白的表达;并经ni2+-nta亲和层析柱纯化出纯度约90%的ctp-foxm1融合蛋白;westernblot进一步鉴定ctp-foxm1融合蛋白;细胞免疫荧光和激光共聚焦观察显示出ctp-foxm1融合蛋白转导进入dcs内主要定位于胞浆。(2)融合蛋白ctp-foxm1负载dcs疫苗与ctp、foxm1负载dc疫苗相比,能够更明显地刺激同源异体淋巴细胞的增殖,且增殖能力达到最佳效果是在dcs与淋巴细胞以效靶比为10:1的比例条件下。在杀伤hepa1-6肝癌细胞株ctl应答效应的体外实验中,ctp-foxm1抗原负载dcs疫苗对hepa1-6肝癌细胞株的杀伤效应明显强于其他实验组及其对照组。(3)ctp-foxm1、ctp、foxm1抗原负载dcs疫苗免疫c57bl/6小鼠后产生抗肝癌hepa1-6细胞皮下瘤模型的免疫预防效应观察中,在皮下瘤建立后的第7、9、11、13、15、17天观测,ctp-foxm1对小鼠皮下瘤的免疫预防效应明显优于其他实验组及对照组。结论:(1)经ni2+-nta亲和层析得到较高纯度的融合蛋白ctp-foxm1,并由激光共聚焦观察可知ctp-foxm1具有明显dcs的胞浆定位偏性,为后续制备ctp-foxm1负载的dc疫苗奠定基础。(2)融合蛋白ctp-foxm1负载dcs疫苗能够有效地刺激同源异体的淋巴细胞增殖,并对体外hepa1-6肝癌细胞株起特异性ctl应答效应。(3)CTP-FoxM1抗原负载DCs疫苗对C57BL/6小鼠皮下肝癌模型起到免疫预防的作用,因此,为临床应用DC疫苗防治肝癌奠定了理论基础。