端粒是真核生物细胞染色体末端的特殊核酸蛋白结构,能保护染色体末端,防止发生核酸外切酶降解和染色体之间端端融合,以维持染色体结构的稳定。端粒长度维持对于肿瘤细胞保持永生化至为重要。端粒重复序列由端粒酶合成。近年来的研究表明,除了端粒酶之外,还有众多的因素通过多种途径参与了端粒的调控。许多研究发现,端粒酶与胃癌的发生、发展密切相关。端粒结合蛋白TRF1 和TRF2 在端粒保护和维持中起关键作用。TRF1 通过抑制端粒酶与端粒相互作用而对端粒长度进行负向调节。目前已发现数种蛋白与TRF1 和RF2 有关。Tankyrase,一种PARPs 家族的成员,起初作为一个与TRF1 结合的蛋白而鉴定出来。Tankyrase 体外能使TRF1 发生ADP核糖基化而抑制其与端粒重复片段结合。提示tankyrase 是端粒长度的正向调节因子,有可能成为肿瘤基因治疗的一个靶点。为此,我们首先构建反义tankyrase 基因真核表达载体,并采用脂质体法将其导入SGC-7901、7901-ahTR 和7901-ahTRT 细胞,观察反义tankyrase 基因对胃癌细胞端粒结合蛋白TRF1 和TRF2、端粒酶活性、端粒长度等的影响,以期阐明tankyrase 在人胃癌细胞端粒长度维持中的作用及其机制。在此基础上,我们进一步观察了反义tankyrase 对胃癌细胞生物学行为的影响,以探讨tankyrase 作为一个新的靶点用于胃癌基因治疗的应用前景。目的1.利用DNA 重组技术构建和鉴定反义tankyrase 真核表达载体2.探讨tankyrase 在胃癌细胞端粒维持中的作用及其机制3.观察反义tankyrase 对人胃癌细胞株SGC-7901 生物学行为的影响,探讨其用于肿瘤基因治疗的潜在价值方法与结果1. 利用基因重组技术构建了反义tankyrase 真核表达载体,并经酶切和DNA 测序鉴定。结果发现反义重组质粒经BamHⅠ酶切后形成8.2kb 和0.2kb 的条带,与理论设计符合,DNA 测序证明插入片段的序列与文献报道一致,但方向相反,说明反义tankyrase 真核表达载体构建成功。