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本研究以波尔山羊精液为实验材料,采用二步稀释法在降温前以脱脂乳-卵柠液为洗涤液,应用离心洗涤法去除精浆,并采用超微结构分析,谷草转氨酶活力测定,以及异种穿卵试验等多种方法,探讨除精浆对山羊精子冷冻保存效果的影响,并对其机理进行分析。实验结果如下: 1 以脱脂乳-卵柠液为离心介质,以1000r/min离心精子2次,每次8min,解冻后精子活率为0.367±0.032、复苏率为56.422±2.481%、顶体完整率为50.142±2.298%、精子畸形率为16.173±2.187%、存活时间为9.517±0.631h:而以未离心、未除精浆的精液为对照组的上述各指标依次为0.378±0.031、59.068±2.289%、51.743±2.272%、14.265±2.323%和9.603±0.764h,两者相比差异均不显著(P>0.05),说明仅离心处理对山羊精液上各指标无显著影响(P>0.05)。而在该离心条件下通过洗涤法去除精浆,则解冻后各项指标依次为0.467±0.041、70.431±6.825%、57.913±2.609%、9.305±2.534%和9.638±0.847h,同对照组相比,精子存活时间差异不显著(P>0.05),而其它指标差异均极显著(p<0.01),说明去除精浆对解冻后山羊精液品质有极显著提高作用。这种作用可能与去除了原精液中有害物质等因素有关。 2 利用透射电子显微镜对冷冻前后精子超微结构的变化进行观察,发现离心处理使冷冻前精子质膜稍扩张,而去除精浆后对冷冻前精子超微结构无显著影响;冷冻后发现未去除精浆可造成解冻后精子出现典型的“假顶体反应”,顶体酶提前释放,线粒体鞘受损严重:而去除浆精后,精子所受冷冻损伤程度明显减少,这可能是除精浆后精子受精能力显著提高的重要原因之一。 3 以精子逸出的谷草转氨酶活力为检测指标,研究除精浆对精子质膜透通性的影响,发现除精浆后精子内逸出的谷草转氨酶显著增多,其活力从降温前、平衡后、解冻后分别为280.8±60.8U、376.08±76.5U和492.88±93.5U;而对照仅为209.8±16.7U、268.8±47.5U、259.4±29.4U,两者差异极显著(p<0.01),表明除精浆后精子质膜通透性明显增大。 4 利用去透明带仓鼠检测解冻后精子受精能力,去除精浆后精子穿卵率可达82.312±7.478%,而未去除精浆时则仅为69.398±2.904%,两者差异极显著(p<0.01),表明去除精浆后精子受精能力显著提高。