凝集素是一种无免疫原性的蛋白质,广泛存在于动物、植物和微生物中。植物凝集素不仅具有凝集细胞的作用,并且参与体内一些重要的生理过程,已经广泛应用于农业、畜牧业及医药等行业。凝集素受体是存在于细胞膜表面的糖蛋白或糖脂,可以与相应的凝集素发生特异性的结合。许多实验证据表明,凝集素受体在受精、妊娠等生殖过程中有具有重要的影响和作用。芸豆植物凝集素(kidney bean lectin,KBL)是从芸豆中提取的糖蛋白,其特异性结合糖为β-半乳糖、α-甘露糖和α-乙酰葡萄糖胺。本实验室以往的研究发现KBL具有抑制受精、终止不同时期妊娠的作用,但对其机理还缺乏较为系统和全面的研究。因此,本研究从整体、组织、细胞及分子水平进行了一些相关的研究。目的:探究KBL在终止小鼠妊娠过程中对相关性激素、胎盘和子宫的影响,为研究KBL终止妊娠的机制提供实验依据。同时,考虑将来的临床应用,也研究了不同性别的小鼠对KBL的耐受性。以期为生殖医学和研究新型避孕药提供基础实验依据。方法:1、通过非手术法子宫给药的方式观察红芸豆植物凝集素(Red kidney bean lectin,RKBL)在终止昆明小鼠妊娠过程中对生殖内分泌激素的影响。2、对RKBL处理的小鼠胎盘进行形态学观察、台盼蓝染色、甲基绿-派诺宁染色、DNA电泳、TUNEL检测,8-异前列腺素F2α的测定,了解RKBL在终止小鼠妊娠过程中对胎盘的影响。3、通过测定并比较培养乳酸菌和盘基网柄菌前后的培养基中RKBL的凝集活性和分子的完整性。4、选用经口(限量试验)和经腹腔(LD50测定)两种方式对RKBL进行了急性毒性试验。结果:1、在性激素变化方面,应用RKBL终止妊娠过程中孕鼠血清中E2、FSH、LH和T无明显变化;P和PRL在注射RKBL后呈先升高后降低的趋势,并且在对照组与实验组间差异显著;胎盘匀浆的8-iso-PGF2α水平无明显变化,而子宫匀浆8-iso-PGF2α水平在给药后明显下降。2、在组织水平,RKBL可导致妊娠小鼠胎盘出现充血和坏死的现象,胎盘边缘有明显台盼蓝染色;3、在细胞和分子水平,甲基绿-派诺宁染色与TUNEL检测、DNA电泳条带显示胎盘出现坏死和凋亡现象;4、在作用方式上,RKBL在促进乳酸菌和盘基网柄菌增殖的同时其凝集活性和含量不会降低。5、不同性别的急性毒性试验结果表明,腹腔单次注射RKBL,雌鼠LD50为743.242 mg/kg,其95%可信区间为658.053~848.953 mg/kg;雄鼠LD50为535.452 mg/kg,其95%可信区间为480.961~598.818 mg/kg;限量试验结果大于5000 mg/kg。结论:1、使用RKBL终止小鼠中期妊娠时不改变孕鼠体内的E2、FSH、LH、T和8-异前列腺素F2α水平,而对P和PRL有较大影响,提示RKBL终止小鼠妊娠不是通过影响整体神经内分泌轴(下丘脑-垂体-靶腺轴)的下丘脑及垂体水平而实现。2、注射RKBL后引起小鼠胎盘坏死、凋亡或副凋亡,提示RKBL终止妊娠主要是通过引起胎盘坏死、凋亡或副凋亡途径实现的。3、RKBL能够在细胞外促进乳酸菌和盘基网柄菌增殖,且这种增殖作用主要是通过细胞外信号传递方式,RKBL本身不会作为能源物质被利用或降解。4、RKBL的属于低毒,对不同性别的昆明小鼠具有量效作用差异。单次腹腔注射RKBL,雌鼠的耐受性高于雄鼠。