双链DNA中G四聚体的形成以及利用DNA足迹实验鉴定G四聚体结构

来源 :武汉大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:qwe8056
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
核酸可以形成一种叫做G-quadruplex的四聚体结构,在不同物种的基因组中,具有形成G-quadruplex能力的DNA序列数量非常庞大。越来越多的研究显示这些G-quadruplex结构参与基因转录渊控,因而成为癌症和其他疾病的重要治疗靶点。除了端粒3’悬突以外,基因组G-quadruplex序列大部分都分布在双链DNA中间,附近不仅有互补的DNA与之配对,其两侧还有双链DNA限制。目前为止,有关双链DNA中G-quadruplex/duplex竞争的研究很少。在本研究中,我们制备了来自人基因组的含有不同G-quadruplex形成序列的双链DNA,分别在稀释溶液和PEG制造的分子拥挤环境下将双链进行加热变性退火和体外转录,结果发现,在分子拥挤条件下,加热变性退火和发生RNA转录的双链DNA中有G-quadruplex形成。我们使用DMS footprinting以及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验对G-quadruplex的形成进行了证明。我们的实验结果还发现,加热变性退火后非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳可以提供一种衡量G-quadruplex在双链DNA中形成能力的简单方法。利用此方法我们研究了K离子和PEG200的浓度对G-quadruplex形成能力的影响,结果发现,PEG制造的分子拥挤环境是双链DNA中G-quadruplex稳定存在所必须的。大多数G-quadruplex在双链DNA中形成需要的PEG浓度在30-40%,和体内细胞中牛物分子浓度接近。这个现象指示分子拥挤环境可能是体内基因组中G-quadruplex形成的生理基础。基因组中G-quadruplex序列数量巨大且分布广泛,它们在基因表达调控中的作用使得G-quadruplex结构成为人们设计药物分子治疗疾病的靶点。研究生理条件下基凶组双链DNA由G-quadruplex的结构特征对寻找靶向G-quadruplex的药物具有重要的指导意义。利用上述加热变性退火后非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,我们筛选到一种特异性识别并结合G-quadruplex的酞菁分子Zn-TTAPc,这种小分子具有两个特殊的性质,1)可以特异性结合于G-quadruplex的G-quatert平面;2)在紫外光照射下可以在结合位点处切割DNA。在本研究中,我们发展了一种可以解析G-quadruplex折叠方式的光切割footprint方法。通过比较酞菁分子对G-quadruplex两个末端平面切割程度的差异,我们可以解析出形成G-quadruplex的阴条G-tract的5’-3’走向,从而了解整个G-quadruplex的结构类型。这种方法简单明了,而且不需要非常专业的知识。并且,该酞菁分子对G-quadruplex的选择性远高于双链以及单链DNA,这种方法还可以应用于鉴定长单链和双链DNA中G-quadruplex的形成。
其他文献
叶色突变是植物界中广泛存在的一种变异现象。利用不同方法已在多种植物中创制并鉴定出叶色突变体,尤以黄化突变最多,在突变表型特征、生理机制、遗传特性及突变基因定位克隆
灵芝自古便是中国传统医学中的珍贵药材,具有滋补强身、扶正固本之效。在灵芝中提取的一些小分子物质如蛋白质,多糖等也有着免疫调节、抗肿瘤等功效。灵芝蛋白-8(LZ-8)是从灵芝
研究人员声称,欢快的音乐可以提高思维的灵敏度和集中度。在进行挑战性脑力工作的同时,播放曲调欢快的协奏曲,可以让人们的工作效率更高更准确。心理学家称,欢快的协奏曲的确
随着网络信息技术的成熟,互联网销售、购物已经成为正常且基本的商业行为。我国一些农村地区开始通过淘宝网络平台进行地方特色产品的销售,对传统产业进行了互联网“+”的商
流行性腮腺炎(简称流腮)是儿童和青少年常见的呼吸道传染病,是国家法定报告丙类传染病。患者和隐性感染者均是本病的传染源;腮腺炎病毒可通过飞沫传播,传染性强,在幼儿园、小
本文以我国农业企业会计特征为出发点,分析我国现阶段农业企业会计核算的问题,包括会计核算信息缺乏真实性和农产品核算资料不够详细等,然后深入研究我国会计核算信息失真的
随着“三网融合”时代的到来,传统广电网络(有线)行业被卷入一场白热化的市场竞争,他们逐渐加强了对网格化管理的重视,这主要是因为在企业发展过程中应用网格化管理能够促进
文章通过对符号学的理解,梳理了贝壳这一符号元素在西方绘画作品中的常见意涵。进而通过列举文艺复兴与巴洛克时期的三幅名画《维纳斯的诞生》《寓言》《牡蛎宴》,分析画中不
石家庄地区冷棚油桃栽培经历了不断发展后具备了一定规模。同时也面临着市场价格不稳定、棚室管理温湿度控制差异大、整形修剪不规范导致树体早衰、超剂量使用化控剂和化肥引
目的:利用噬菌体展示技术体内筛选法获得人髓样乳腺癌细胞Bcap-37特异性结合肽,为乳腺癌早期诊断提供分子靶向探针。方法:制备人髓样乳腺癌Bcap-37细胞荷瘤裸鼠模型,采用噬菌体环七肽库进行3轮体内筛选。免疫组化检测筛选过程中噬菌体在肿瘤及正常组织中的分布情况。酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定单克隆噬菌体对Bcap-37细胞的亲和力。提取阳性单克隆噬菌体DNA并测序,选取重复率高的序列合成多肽