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第一部分自身免疫性甲状腺疾病自身反应性CD8+T细胞特征及临床意义目的通过检测AITD患者体内甲状腺特异性HLA限制性CD8+T细胞数量,识别甲状腺抗原特异性CD8+T细胞表位,探讨特异性致病表位与临床特征的关系。方法运用HLA Ⅰ类肽亲和力算法预测HLA-A2限制性候选甲状腺特异性CD8+表位肽。研究共纳入534名AITD患者(含244例GD和290例HT)和177例健康对照,通过HLA-A基因分型筛选出HLA-A*0201基因型AITD患者38例(含13例GD和25例HT患者)和健康对照16例。应用γ干扰素(interferon-γ,INF-γ)酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunospot assay,ELISpot)检测Tg-,TPO-和TSHR-特异性CD8+T细胞表位特点。结果在38例AITD患者中,有13名(34.21%)患者至少一种甲状腺特异性表位呈阳性反应。与健康对照组相比,GD患者TG-6表位肽阳性率显著升高(35.8%vs 0%,P=0.011)。未发现HT患者和健康对照组各甲状腺特异性表位肽的阳性率之间存在统计学差异。AITD亚组中,GD患者的TG-6、TG-7、TG-10、TG-11和TPO-6共5个表位肽的阳性率高于HT患者(TG-6:38.5%vs 8%,P=0.034;TG-7,TG-10,TG-11和TPO-6阳性率均为23.1%vs 0%,P=0.034)。在HT患者中,TgAb阴性组(n=5)的TG-6的阳性率为40%,显著高于TgAb阳性组(n=20)(40%vs.0%,P=0.033)。结论本研究应用IFN-γ ELISpot方法检测了 AITD患者和健康对照组甲状腺自身抗原(Tg-、TPO-和TSHR-)特异性CD8+T细胞,首次报道了 TG-6是GD患者Tg特异性HLA限制性CD8+T细胞表位肽。筛选甲状腺特异性T细胞表位,明确自身反应性CD8+T细胞特征将有助于AITD的预测、诊断及分型,并且有可能成为疾病潜在的治疗新靶点。第二部分自身免疫性甲状腺疾病中滤泡辅助性T细胞的特征及临床意义目的观察自身免疫性甲状腺疾病患者中滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cells,Tfh)的频率及其功能性分子ICOS和PD-1的表达特征,探讨Tfh在AITD发病机制中的作用及临床意义。方法研究共纳入自身免疫性甲状腺疾病患者共计104例,非自身免疫性甲状腺疾病患者(nAITD)共20例,健康对照43例;AITD患者中,80例行甲状腺细针穿刺(FNA)留取标本,38例患者留取外周静脉血。应用流式细胞术检测AITD患者和健康对照组外周血中、AITD和nAITD患者甲状腺FNA标本中Tfh细胞频率及功能性分子ICOS和PD-1的表达特征,并分析其与甲状腺自身抗体和甲状腺功能等临床指标的关系。结果HT患者FNA标本中甲状腺局部Tfh细胞表面ICOS的表达较nAITD患者显著升高(11.15±13.56%vs 22.24±16.16%,P=0.008)。共有 14 例 AITD 患者同时留取了外周血和FNA标本,甲状腺内Tfh频率及其表面ICOS和PD-1的表达较外周血中显著升高(32.86±17.00%vs 16.07±4.02%,P=0.003;12.13±7.86%vs 2.33±0.88%,P=0.000;24.79±14.67%vs 7.23±2.05%,P=0.001)。AITD 患者甲状腺内Tfh细胞表面ICOS和PD-1的表达与Tfh细胞频率呈显著正相关(r=0.7734,P<0.0001;r=0.9486,P<0.0001);患者血清TgAb水平与FNA标本中Tfh频率及其表面ICOS和PD-1的表达均呈显著正相关(r=0.3276,P=0.0068;r=0.3989,P=0.0011;r=0.4035,P=0.0009)。AITD 患者外周血 cTfh 表面 ICOS 和 PD-1 的表达与 cTfh 细胞频率呈显著正相关(r=0.3825,P=0.0178;r=0.9035,P<0.0001)。HT 患者 TgAb(r=0.7161,P=0.03)及 TPOAb(r=0.6886,P=0.0403)水平与 cTfh表面ICOS的表达呈正相关。结论本研究首次检测了 FNA标本中甲状腺局部Tfh的频率和表达特征,AITD患者甲状腺内Tfh及表面标记ICOS和PD-1的表达显著高于外周血,并且AITD患者甲状腺自身抗体水平与Tfh频率显著相关。Tfh参与AITD细胞免疫发病机制并调控甲状腺自身抗体的形成,有可能成为疾病诊治的新靶点。