【摘 要】
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为探索安全高效的新型动物分子免疫增强剂,本实验设计了一新型CpG寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN),包含11个CpG基序,同时设计一对引物,在其两端引入PstⅠ酶切位点
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为探索安全高效的新型动物分子免疫增强剂,本实验设计了一新型CpG寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN),包含11个CpG基序,同时设计一对引物,在其两端引入PstⅠ酶切位点。应用PCR技术扩增CpG ODN,回收纯化后以MTT法体外检测其对动物血液淋巴细胞的刺激增殖活性。结果发现此CpG ODN能显著刺激动物血液淋巴细胞的增殖,具有较强的免疫刺激活性。用离子交联法制备了壳聚糖纳米颗粒(chitosan nanoparticles,CNP),探索了CNP包装CpG和介导DNA转染动物细胞的特征。用此CNP包裹CpG ODN,联合副伤寒疫苗或单独接种21日龄昆明小鼠后,每周尾静脉采血用ELISA分析免疫小鼠IgG、IgA、IgM、IL2、IL4和IL6水平,检测淋巴细胞、单核细胞、粒细胞和白细胞数量的变化,,观察此CpG ODN及其壳聚糖纳米颗粒包装后对小鼠免疫应答及免疫保护的调节作用。实验结果发现:CpG及其CNP包装组的各项体液和细胞免疫指标较对照组均显著提高(P<0.05),沙门氏菌攻毒结果表明该CpG显著增强小鼠对沙门氏菌感染的免疫抵抗力,提高其免疫保护率。接着将此CpG用PstⅠ酶切后与质粒VR1012连接,构建新型免疫刺激分子CpG-VR1012。酶切鉴定结果表明CpG分子与VR1012连接成功。同样制备壳聚糖纳米颗粒并免疫小鼠。实验结果发现:CpG-VR1012及其CNP接种小鼠的体液免疫机能较对照组显著增强,其血清中IL-2和IL-4、IL-6含量显著高于对照组,外周血液的白细
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