哺乳动物内质网体中FKBP23与BiP结合行为的研究

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FK506结合蛋白(FK506 binding protein,FKBP)是免疫抑制剂FK506(Tacrolimus)在生物体内的天然配体,与另两类免疫抑制剂Cyclosporin A体内的配体亲环素(cyclophiIin CyP)和Rapamycin共同称为亲免素或亲免蛋白(Immunophilin)。亲免蛋白具有两大主要特征:一是遗传上的保守性,二是肽脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性。FKBP23是1998年在小鼠内质网(endoplasmicretictdum,ER)中发现的一个FKBP家族的蛋白质。它由一个N端的肽脯氨酰顺反异构酶结构域和一个C端的含有钙离子结合模体的结构域组成。BiP是Hsp70家族在内质网体中的成员。在生命体中,蛋白质在其生理位置需折叠成具有正常生理功能的空间结构才具有活性。Hsp70家族蛋白在生物体内的主要功能是在蛋白质于细胞内亚细胞结构间转运的过程及其折叠过程中,充当分子伴侣的角色。 我们曾利用免疫沉淀的方法证明小鼠内质网体中FKBP23与BiP特异性结合,并受Ca<2+>浓度影响。在本实验中我们通过sephadex G-75凝胶色谱法进一步验证了不论是克隆的还是天然ER中的FKBP23和BiP都有这种受Ca<2+>浓度影响的特异性结合行为,同时,通过GFC柱行为,从复合物对应的分子量我们可以知道,在体内和体外,FKBP23和BiP都是1:1结合,即一分子FKBP23和一分子BiP结合的,这是亲和吸附和免疫沉淀方法所无法得知的。 pFKBP23的序列目前在NCBI中没有公布。我们通过其他物种同源性分析、cDNA双链的合成,nest-PCR等方法得到了pFKBP23的序列。同时,由得到的序列可以看出,所得的pFKBP23的序列没有从TAG开始,所以序列并不完全,因此还要继续重复以找到序列最前端。
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