研究背景:胎盘是妊娠期母胎之间进行物质交换和氧气运输的重要器官,对于维持胎儿正常生长发育至关重要。胎盘功能障碍,如滋养细胞合体化受损、侵入不足、代谢过程受损以及血管生成障碍等与胎儿生长受限（Fetal growth restriction,FGR）等妊娠并发症的发生密切相关。多项研究表明,孕早期开始服用低剂量阿司匹林（Aspirin,ASA）能够有效预防FGR等不良妊娠结局的发生。然而,低剂量ASA对胎盘滋养细胞功能的影响及其具体作用机制目前仍未被完全阐明。第一部分:低剂量ASA通过乙酰化修饰HADHA促进滋养细胞脂肪酸氧化研究目的:明确胎盘脂肪酸氧化受损与FGR之间的关系;探究低剂量ASA对胎盘滋养细胞脂肪酸氧化能力的影响及其具体作用机制。研究方法:qRT-PCR评价人正常和FGR胎盘中脂肪酸氧化相关基因的表达差异;CCK8检测不同浓度ASA处理不同时间对Be Wo细胞的毒性作用;BODIPYTMFL C16摄取试验以及[9,10~3H]palmitate标记试验共同评价低剂量ASA对于细胞外源性长链脂肪酸摄取能力的影响;q RT-PCR和ATP检测试验分别明确低剂量ASA对于Be Wo细胞脂肪酸氧化及ATP生成能力的影响;Western blot明确ASA对于Be Wo细胞全蛋白赖氨酸乙酰化水平的影响;蛋白质组学明确ASA对脂肪酸代谢相关基因的乙酰化修饰作用及其可能作用位点;免疫沉淀验证Be Wo细胞中ASA对脂肪酸氧化关键酶HADHA的乙酰化修饰作用;通过模拟乙酰化突变（KQ）和去乙酰化突变（KR）明确ASA乙酰化作用于HADHA的赖氨酸位点。研究结果:人FGR胎盘中脂肪酸氧化相关基因的表达较正常胎盘显著下调;5m M ASA处理Be Wo细胞以及不同浓度ASA处理Be Wo细胞24h后均会对细胞有显著毒性作用;1m M ASA处理细胞24h显著促进Be Wo细胞长链脂肪酸摄取及氧化;1m M ASA处理24h显著提高Be Wo细胞全蛋白赖氨酸乙酰化水平;蛋白质组学筛选发现ASA能够乙酰化修饰脂肪酸氧化关键酶HADHA,且其主要乙酰化修饰HADHA的K531位点;免疫沉淀结果显示,Be Wo细胞经1m M ASA处理24h后,脂肪酸氧化关键酶HADHA的乙酰化水平显著增加,且HADHA的酶活性增加;HADHA K531位点模拟KQ突变后促进脂肪酸氧化和ATP生成,模拟KR突变后抑制脂肪酸氧化和ATP生成。研究结论:人FGR胎盘脂肪酸氧化受损,而低剂量ASA通过乙酰化修饰脂肪酸氧化关键酶HADHA促进胎盘脂肪酸氧化过程可能作为低剂量ASA干预FGR的潜在机制之一。第二部分:低剂量ASA通过靶向HADHA负调控PI3K/AKT通路进而促进滋养细胞迁移侵袭研究目的:明确低剂量ASA对于HADHA的调控作用及对HTR-8/SVneo细胞迁移能力的影响;明确HADHA基因对人滋养细胞HTR-8/SVneo的迁移和侵袭能力的影响及其潜在作用机制;探究低剂量ASA影响滋养细胞迁移侵袭的分子机制。研究方法:细胞划痕试验明确1m M ASA对于HTR-8/SVneo细胞迁移能力的影响;q RT-PCR、Western blot评价1m M ASA处理24h对于HTR-8/SVneo细胞中HADHA表达水平的影响;组织荧光评价HADHA在不同类型滋养细胞中的表达模式;慢病毒系统构建HADHA过表达及敲低稳转HTR-8/SVneo细胞系,并采用q RT-PCR、Western blot、Transwell、细胞划痕实验评价HADHA对HTR-8/SVneo细胞迁移侵袭能力和相关基因表达的影响;转录组测序及生物信息学分析筛选HADHA可能调控的靶基因及信号通路;加入AKT抑制剂MK-2206明确HADHA调节HTR-8/SVneo细胞迁移侵袭的具体分子机制。研究结果:1m M ASA处理24h显著促进了HTR-8/SVneo细胞迁移;HADHA的m RNA及蛋白水平在ASA处理后的HTR-8/SVneo细胞中较对照组低;HADHA在细胞滋养细胞和合体滋养细胞中相对高表达,在绒毛外滋养层细胞中相对低表达;过表达HADHA的HTR-8/SVneo细胞中迁移侵袭相关基因HLA-G、MMP2、MMP9、NCAD的表达水平较对照组显著降低,且迁移和侵袭能力减弱;敲低HADHA后,HLA-G、MMP2、MMP9、NCAD的表达水平升高,且迁移侵袭能力增强。此外,过表达HADHA后p-PI3K、p-AKT水平降低,PI3K/AKT信号通路被抑制;敲低HADHA后PI3K/AKT信号通路被激活;在HADHA敲低稳转细胞系中加入AKT抑制剂MK2206后,细胞迁移侵袭能力明显减弱。研究结论:HADHA通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制HTR-8/SVneo细胞的迁移与侵袭,而低剂量ASA能够通过下调HADHA的表达促进HTR-8/SVneo细胞迁移。