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目的:
观察乳鼠心肌细胞的缺氧损伤以及缺氧复氧条件下不同复氧时间对乳鼠心肌细胞损伤的变化以及胡黄连苷Ⅱ对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。
方法:
实验用SD新生大鼠(出生1~3d),雌雄不拘,常规方法培养心肌细胞,在培养48h后随机分组:正常对照组(Control组)、缺氧/复氧组(A/R组)、缺氧/复氧0.5h组、缺氧/复氧1h、组缺氧/复氧2h组、胡黄连苷Ⅱ-50组(picrosideⅡ-50)、胡黄连苷-100组(picrosideⅡ-100)、胡黄连苷Ⅱ-200组(picrosideⅡ-200)。用MTT法检测缺氧损伤及不同复氧时间对乳鼠心肌细胞存活率的影响以及经胡黄连苷Ⅱ干预对心肌细胞存活率的影响;LDH、T-SOD、GSH/GSSG试剂盒检测缺氧损伤及不同复氧时间下细胞损伤及胡黄连苷Ⅱ对心肌细胞的保护作用。ROS检测胡黄连苷Ⅱ的保护作用。
结果:
1、细胞存活率:与正常对照组相比,缺氧组心肌细胞明显受损,缺氧组心肌细胞存活率(68.4%)较对照组心肌细胞存活率(100%)明显降低(p<0.05)。A/R组心肌细胞存活率(41.0%)较缺氧组心肌细胞存活率(68.4%)进一步降低(p<0.05)。胡黄连苷Ⅱ-50,100,200组较缺氧复氧组有明显保护作用,胡黄连苷Ⅱ-50组(66.4%),100组(84.2%),200组(82.0%)心肌细胞存活率较缺氧复氧组心肌细胞存活率(41.0%)明显升高(P<0.05)。胡黄连苷Ⅱ-100组(84.2%),200组(82.0%)较胡黄连苷Ⅱ-50组(66.4%)心肌细胞存活率明显升高(p<0.05),而胡黄连苷Ⅱ-100组(84.2%)与胡黄连苷Ⅱ-200组(82.0%)心肌细胞存活率无显著差别(P>0.05)。
2、LDH活性:与对照组(5.95±0.76 U/L)相比,缺氧组(16.78±1.08 U/L)LDH提高了183.53%;与缺氧组相比,缺氧/复氧0.5h组(31.99±1.33 U/L) LDH提高了90.64%;与缺氧/复氧0.5h组相比,缺氧/复氧1h组(37.32±2.12 U/L)LDH提高了16.66%(均P<0.05),缺氧/复氧2h组较缺氧/复氧1h组无统计学显著性差异。胡黄连苷Ⅱ50组(21.04±1.68 U/L)LDH较缺氧/复氧组减少了43.62%(P<0.05);胡黄连苷Ⅱ100组(14.67±0.81 U/L) LDH较缺氧/复氧组减少了60.69%(P<0.05);胡黄连苷Ⅱ200组(14.67±0.81 U/L)LDH较缺氧/复氧组减少了65.14%(P<0.05)。胡黄连苷Ⅱ200组较胡黄连苷Ⅱ1200组无统计学显著性差异。
3、GSSG活性:与对照组(35.63±1.36μmol/L)相比,缺氧组(42.27±1.50μmol/L)GSSG提高了18.64%;与缺氧组相比,缺氧/复氧0.5h组(50.86±1.16μmol/L)GSSG提高了20.32%;与缺氧/复氧0.5h组相比,缺氧/复氧1h组(58.10±2.25μmol/L)GSSG提高了14.23%(P<0.05),缺氧/复氧2h组较缺氧/复氧1h组无统计学显著性差异。胡黄连苷Ⅱ50组(48.33±1.88μmol/L) LDH较缺氧/复氧组减少了16.82%(P<0.05);胡黄连苷Ⅱ100组(38.77±1.57μmol/L)LDH较缺氧/复氧组减少了33.27%(P<0.05);胡黄连苷Ⅱ200组(38.14±1.17μmol/L)LDH较缺氧/复氧组减少了34.35%(P<0.05)。胡黄连苷Ⅱ200组较胡黄连苷Ⅱ200组无统计学显著性差异。
4、GSH活性:与对照组(64.95±3.87μmol/L)相比,缺氧组(50.27±4.10μmol/L)GSH降低了22.60%;与缺氧组相比,缺氧/复氧0.5h组(32.95±2.71μmol/L)GSH降低了34.45%;与缺氧/复氧0.5h组相比,缺氧/复氧1h组(22.96±4.04μmol/L)GSH降低了30.32%(均P<0.05),缺氧/复氧2h组较缺氧/复氧1h组无统计学显著性差异。胡黄连苷Ⅱ50组(30.52±2.08μmol/L)LDH较缺氧/复氧组升高了32.93%(P<0.05);胡黄连苷Ⅱ100组(40.36±2.71μmol/L)LDH较缺氧/复氧组升高了76.09%(P<0.05);胡黄连苷Ⅱ200组(41.63±2.52μmo1/L)LDH较缺氧/复氧组升高了81.32%(P<0.05)。胡黄连苷Ⅱ200组较胡黄连苷Ⅱ200组无统计学显著性差异。
5、SOD活性:与对照组(106.35±5.72 U/mg pro)相比,缺氧组(80.53±3.56U/mg pro)SOD降低了24.28%;与缺氧组相比,缺氧/复氧0.5h组(59.88±2.98 U/mgpro) SOD降低了17.54%;与缺氧/复氧0.5h组相比,缺氧/复氧1h组(49.38±2.44U/mg pro) SOD降低了17.53%(均P<0.05),缺氧/复氧2h组较缺氧/复氧1h组无统计学显著性差异。胡黄连苷Ⅱ50组(69.88±2.98 U/mg pro)LDH较缺氧/复氧组升高了41.51%(P<0.05);胡黄连苷Ⅱ100组(88.71±4.44 U/mg pro)LDH较缺氧/复氧组升高了79.64%(P<0.05);胡黄连苷Ⅱ200组(91.00±4.13 U/mg pro)LDH较缺氧/复氧组升高了84.28%(P<0.05)。胡黄连苷Ⅱ200组较胡黄连苷Ⅱ200组无统计学显著性差异。
6、ROS活性:缺氧/复氧组ROS水平较对照组明显升高,而胡黄连苷Ⅱ组中ROS水平较缺氧/复氧组低。
结论:
缺氧/复氧可对心肌细胞造成损伤,且损伤于1小时后趋于稳定。而胡黄连苷Ⅱ对心肌细胞具有保护作用,且呈剂量依赖性,浓度为100μg/ml时可见最显著的保护作用。