小麦TaCKB4在光形态建成和盐胁迫中的功能分析

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植物在生长过程中受到光、温度、干旱等多种环境因子的影响,各环境因子既可以单独作用,也可以通过形成复杂而有序的调控网络共同影响植物的生长。本实验室前期以普通小麦济南177(JN177)为亲本创制了小麦渐渗系耐盐品种山融3号(SR3),并从中鉴定了两个蓝光和盐胁迫响应基因,GBF类转录因子TaGBF1及其可能靶基因CKII家族基因TaCKB4,我们发现前者促进蓝光介导的光形态建成,而后者在拟南芥中的异位表达抑制蓝光介导的光形态建成,另一方面二者均降低萌发阶段的耐盐能力。本论文在此基础上进一步分析了TaCKB4在小麦中对光形态建成和盐胁迫应答的影响,并初步分析了TaCKB4和TaGBF1的关系。在白光和蓝光处理下,与受体小麦相比,TaCKB4过表达株系小麦的胚芽鞘长度明显增加,并且蓝光下增加的幅度更显著,但红光条件下无显著差异,这表明TaCKB4在小麦中特异性抑制蓝光介导的光形态建成,与TaGBF1的作用相反。我们发现,在蓝光下,与JN177相比,SR3的胚芽鞘长度更长,且SR3中TaGBF1表达的诱导幅度及TaCKB4表达的抑制幅度均较JN177低,这暗示了TaGBF1-TaCKB4可能与SR3小麦光形态建成的改变存在相关性。为了明确TaGBF1和TaCKB4之间的调控关系,我们分析了TaGBF1过表达和RNAi系中TaCKB4的表达情况。结果表明,白光和蓝光下TaGBF1过表达抑制TaCKB4的表达,而RNAi系则相反,黑暗条件下无显著差异。ChIP-qPCR显示TaGBF1能够结合TaCKB4的启动子。结合前期结果,我们初步发现TaGBF1通过抑制TaCKB4促进蓝光介导的光形态建成。BiFC分析发现,TaCKB4和TaHY5之间存在相互作用,并且互作发生在细胞核中。拟南芥中,白光和蓝光下,TaCKB4过表达抑制HY5靶基因的表达,而TaGBF1过表达则促进这些基因的表达,而黑暗下则无显著差异。同样,小麦中TaCKB4过表达也抑制HY5靶基因的表达,TaGBF1过表达也促进HY5靶基因的表达,而RNAi则相反,并且这一效应依赖蓝光。结果表明,TaGBF1-TaCKB4可能通过HY5参与蓝光介导的光形态建成。盐胁迫下,TaCKB4过表达降低了小麦的萌发率,表明TaCKB4降低了小麦萌发阶段的耐盐能力。我们还发现TaCKB4过表达提高了小麦萌发期对ABA的敏感性;ABA及盐处理下TaCKB4过表达系中WABI5的表达量明显高于受体小麦。BiFC和酵母双杂交分析显示,TaCKB4和WABI5之间存在相互作用,并且互作发生在细胞核中。这些结果说明,TaCKB4可能通过ABI5降低了萌发期的耐盐能力。由于TaCKB4参与盐胁迫应答及蓝光介导的光形态建成,因此我们初步分析了白光和蓝光下TaCKB4对ABI5和HY5的调控,发现白光和蓝光下TaCKB4对4BI5及HY5表达的调控存在一定的差异暗示光质可能影响TaCKB4在盐胁迫中的作用。综上,我们分析了TaCKB4参与蓝光介导的光形态建成和盐胁迫应答的机制,初步明确了TaCKB4在小麦光信号和ABA信号通路中的功能。
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