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显微注射可得到“增强型绿色”甲状腺细胞转基因斑马鱼及斑马鱼甲状腺破坏性模型，并在此基础上建立鱼系，用于甲状腺细胞保护、再生中药的高通量筛选。 目的:本课题拟重构质粒，得到“增强型绿色”甲状腺细胞转基因斑马鱼及斑马鱼甲状腺破坏性模型表达质粒Tol2-tg-egfp及Tol2-tg-nfsb-egfp，从PCR、双酶切、基因测序三个方面确保其正确性，为建立稳定遗传的“增强型绿色”甲状腺细胞转基因斑马鱼及斑马鱼甲状腺破坏性模型鱼系从而筛选出对甲状腺细胞有保护、再生作用的中药奠定基础。 方法:1.重组质粒的构建及基因测序 1.1 重组质粒Tol2-tg-egfp的构建:Tol2tg:mcherry全测序后，用DNAMAN分析得到可将mcherry切除的酶切位点BamHI及NarI，进行双酶切，得到载体Tol2-tg;用PCR方法扩增出带有BamHI及NarI酶切位点的egfp基因片段;egfp基因片段与To12-tg载体连接，将重组子转化进Tran5α感受态细胞中后挑斑，菌液PCR验证、质粒BamHI、NarI双酶切，筛选出阳性克隆并测序。 1.2 重组质粒Tol2-tg-nfsb-egfp的构建:Tol2tg:mcherry全测序后，用DNAMAN分析得到可将mcherry切除的酶切位点BamHI及NarI，进行双酶切，得到载体Tol2-tg;用PCR方法扩增出带有BamHI及NarI酶切位点的nfsb-egfp基因片段;nfsb-egfp基因片段与Tol2-tg载体连接，将重组子转化进Tran5α感受态细胞中后挑斑，菌液PCR验证、质粒BamHI、NarI双酶切，筛选出阳性克隆并测序。基因测序后，用DNAMAN软件分别比较重组质粒中的片段egfp及nfsb-egfp与已知序列同源性。 2.重组质粒Tol2-tg-egfp及Tol2-tg-nfsb-egfp的纯化。 3.转座酶mRNA的合成。 结果:1.成功构建重组质粒Tol2-tg-egfp及Tol2-tg-nfsb-egfp。 2.经测序结果表明，egfp基因片段编码区长720bp，egfp基因序列与已知的相应基因序列比较， 基因序列同源性为100.00％，编码产物的氨基酸序列同源性为100.00％。 3.经测序结果表明，nfsb-egfp编码基因片段编码区长1377bp，nfsb-egfp基因序列与已知的相应基因比较，基因序列同源性为99.86％，编码产物的氨基酸序列同源性为100.00％。4.成功合成转座酶mRNA。 结论:1.成功构建重组质粒Tol2-tg-egfp及重组质粒Tol2-tg-nfsb-egfp，为建立“增强型绿色”甲状腺细胞转基因斑马鱼及斑马鱼甲状腺破坏性模型筛选出对甲状腺细胞有保护及再生作用的中药打下了良好的基础。 2.从PCR、双酶切和测序三个方面证实了所构建的质粒是成功表达的。